一、产品概述
本产品为由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗HA标签多克隆抗体（货号：A190-108A），经抗原亲和纯化，以全IgG形式提供，未偶联标记。该抗体特异性识别HA标签序列（YPYDVPDYA），不依赖于目标蛋白的种属来源，适用于酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫细胞化学（ICC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用。产品浓度为1 mg/ml，储存于2-8°C，有效期为收货后一年。
二、产品规格参数
参数 规格
靶点 HA标签（YPYDVPDYA）
反应性 不依赖于种属
宿主 兔
克隆性 多克隆
形式 全IgG
同型 IgG
偶联物 未偶联
纯度 抗原亲和纯化
浓度 1 mg/ml
缓冲液 磷酸盐缓冲液（PBS），含0.09%叠氮化钠
储存温度 2-8°C
有效期 收货后1年
三、生产工艺与质量控制
3.1 免疫原设计
免疫原为HA标签合成肽（YPYDVPDYA）与匙孔血蓝蛋白（KLH）的偶联物。KLH作为强免疫原性载体蛋白，增强了小分子多肽的免疫应答。
3.2 纯化流程
将HA标签肽固定在固相载体上，通过亲和层析从免疫兔血清中分离特异性抗体。该方法获得高纯度、低交叉反应的抗HA标签抗体。抗体浓度通过比尔定律测定：1 mg/ml IgG在280 nm波长的吸光度为1.4。
3.3 质量控制
纯度：抗原亲和纯化，不含非特异性兔IgG
效价：WB推荐稀释度可达1:30,000，ELISA可达1:30,000
特异性：经验证与HA标签融合蛋白反应，不与常用标签（如His、Myc、Flag、GST）发生交叉反应
四、推荐应用与实验方法
注意：并非所有列出的应用均经过生产实验室的正式验证，最佳工作稀释度需由研究者通过实验确定。
4.1 免疫印迹（Western Blot, WB）
推荐稀释度：1:1,000 - 1:30,000
4.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）
推荐用量：1 - 4 µg/mg裂解物
4.3 免疫细胞化学（Immunocytochemistry, ICC）
推荐稀释度：1:100 - 1:400
阳性对照：使用已知表达HA标签蛋白的细胞系（如转染pCDNA3.1-HA-目标基因的HEK293细胞）
4.4 酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）
推荐稀释度：
检测用一抗：1:1,000 - 1:30,000
包板用一抗：1:100 - 1:500（若将本抗体用作包被抗体捕获HA标签蛋白）
五、储存与稳定性
储存温度：2-8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、聚集和效价下降。
缓冲体系：磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2-7.4），含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。
有效期：收货后1年内稳定。建议分装成单次使用量（如5-10 µl），储存于2-8°C，避免污染。
运输条件：冰袋运输。收到后请立即检查是否浑浊或沉淀。
六、使用注意事项
1.叠氮化钠影响：缓冲液含0.09%叠氮化钠，对细胞有毒且抑制HRP活性。若计划进行细胞培养添加实验或对IP产物进行HRP标记检测时无需去除（因为WB步骤中叠氮化物被稀释），但若需偶联HRP则必须通过透析或脱盐柱去除。
2.多克隆抗体批次差异：不同批次间可能存在效价差异，建议对大批量实验预留批次间验证环节。本抗体为亲和纯化，差异相对较小。
3.交叉反应性：本抗体特异性识别HA标签序列（YPYDVPDYA）。与常见的其他表位标签（Myc、Flag、His、V5、GST等）无交叉反应，但建议用户在实际样本中设置阴性和阳性对照进行验证。
4.标签位置影响：HA标签融合于目标蛋白的N端、C端或内部时，抗体的识别效率可能存在差异。若信号较弱，可尝试：
增加抗体使用浓度
延长一抗孵育时间
在变性条件下（WB）检测效果通常优于天然条件（IP、ICC），但多克隆抗体对天然表位也有良好识别能力
5.稀释度优化：推荐稀释度为一般参考范围，实际最佳稀释度需根据样本类型、实验体系和检测灵敏度进行梯度预实验确定。WB可从1:5,000开始，ICC从1:200开始，ELISA从1:10,000开始。
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*本技术资料基于产品说明书及HA标签通用实验方案编制，具体实验条件请研究者结合融合蛋白特性和实验室平台进行优化。