产品概述
由艾美捷代理的Biogradetech推出的Super Sensitivity Cell Counting Kit-8（超灵敏度细胞计数试剂盒-8，Cat# D-AKE106）是一种基于水溶性四唑盐WST-8的高灵敏度比色检测试剂盒，用于细胞增殖、细胞毒性及药物筛选实验中的活细胞定量分析。本试剂盒具有非放射性、操作简便、灵敏度高等特点，其检测灵敏度优于MTT、XTT、MTS或WST-1等传统四唑盐方法。试剂盒提供即用型CCK-8溶液，无需预混或临时配制，适用于高通量筛选。
检测原理
本试剂盒的核心成分是高水溶性四唑盐WST-8。在活细胞中，线粒体内的脱氢酶（主要是琥珀酸脱氢酶）将WST-8还原为橙黄色的甲臜（formazan） 产物。该产物直接溶解于细胞培养上清中，无需额外添加有机溶剂溶解结晶。甲臜的生成量与培养体系中活细胞的数量呈正比，因此通过酶标仪测定450 nm波长处的吸光度（OD450），即可定量评估细胞的增殖活性或药物对细胞的毒性效应。
相较于MTT法（需用DMSO溶解甲臜结晶），CCK-8的甲臜产物为水溶性，省去了溶解步骤，减少了操作误差。同时，WST-8的还原效率更高，使其在同等细胞数量下产生更强的信号，从而实现更高的检测灵敏度。
试剂盒组分与储存条件
组分 规格（1000T） 规格（10000T） 储存条件
即用型CCK-8溶液 10 mL 100 mL 4°C可保存12个月；-20°C可保存至少24个月，需避光
储存要点：
短期使用（12个月内）可存放于4°C。
长期保存（超过12个月）建议分装后置于-20°C，避免反复冻融。
注意避光：光照会降低试剂稳定性，应使用原装棕色瓶或铝箔包裹保存。
所需材料（试剂盒未提供）
酶标仪：可读取450 nm波长吸光度（参考波长建议620–650 nm）
37°C、5% CO₂的湿润型二氧化碳培养箱
96孔细胞培养板（透明平底，建议使用TC处理表面）
精密移液器及一次性吸头
计时器、摇床（可选，用于混匀）
试剂准备
即用型CCK-8溶液：本品为即用型液体，开瓶后可直接加入细胞培养孔中，无需稀释或预混合。使用前可轻摇混匀，避免产生气泡。
检测步骤（推荐标准流程）
以下为典型96孔板操作流程，用户可根据具体细胞类型和实验设计优化细胞接种密度及孵育时间。
1. 细胞铺板
将细胞悬液按每孔100 µL（含细胞数约1×10⁴–5×10⁴，具体需预实验优化）接种于96孔板中。最外侧边缘孔可加入无菌PBS或培养基以减少边缘效应。将培养板置于37°C、5% CO2培养箱中预培养4–24小时（贴壁细胞需先贴壁；悬浮细胞可直接铺板）。
2. 药物处理（细胞毒性实验）
吸去旧培养基，加入含不同浓度药物的新鲜培养基（每孔100 µL）。每个浓度设置3–6个复孔。同时设置对照组（Ac，含细胞但不含药物）和空白组（Ab，不含细胞和药物的培养基）。继续培养适当时间（根据药物作用动力学，通常为24–72小时）。
3. 加入CCK-8溶液
每孔加入10 µL的即用型CCK-8溶液（注意：避免产生气泡）。轻轻拍打或摇动培养板使混合均匀。
4. 孵育显色
将培养板放回培养箱中继续孵育0.5–4小时。显色时间因细胞类型和密度而异：
快速增殖细胞（如HEK293、HeLa）：1–2小时
慢速增殖细胞（如原代神经元、干细胞）：2–4小时
初筛不确定时，可在1小时后开始监测OD值变化，直至阴性对照孔OD值达到0.8–1.2左右。
5. 吸光度测定
使用酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD450）。若需扣除背景干扰，可采用参考波长620 nm（或650 nm），以450 nm读数减去参考波长读数。注意：测定前可轻轻振动培养板使颜色分布均匀，但避免产生气泡。
重要注意事项
1. CCK-8的细胞毒性极低：CCK-8对活细胞的毒性远低于MTT，因此完成吸光度测定后，可继续将细胞用于后续实验（如免疫染色、RNA提取、传代培养等）。但需注意：若已加入CCK-8并孵育超过4小时，仍可能对细胞产生一定影响，建议尽快使用或根据实验目的判断。
2. OD值过低时的优化策略：
增加初始接种细胞数量
延长加入CCK-8后的孵育时间（最长可至4–6小时，但需保证空白孔OD值无明显升高）
确保细胞在加药处理期间处于对数生长期
3. 干扰因素：
本试剂盒依赖于细胞内脱氢酶的活性，任何影响脱氢酶活性的因素（如温度、pH、特定化合物）均可能干扰检测结果。
若长期培养导致培养基颜色变化或pH漂移（酚红指示剂变黄或变紫），建议在加入CCK-8前更换新鲜培养基（含或不含药物，保持一致）。酚红对CCK-8检测的影响很小，但极端pH会抑制酶活性。
4. 避光操作：CCK-8溶液及加入后的培养板应避免强光直射，以防止光降解。
5. 气泡处理：孔内气泡会导致光散射，影响OD值准确性。加样后可用无菌针头或移液器枪头轻轻挑破气泡，或低速离心（如有适配的板式离心机）。
免责声明
本试剂盒仅限科学研究领域使用，不得用于临床诊断、治疗或任何人体及动物相关应用。使用前请仔细阅读说明书，并严格遵守实验室安全规范。因不当操作或超出预期用途造成的损失，试剂供应商不承担责任。
应用建议总结
细胞增殖实验：设置不同时间点（0、24、48、72小时），绘制生长曲线。
药物细胞毒性筛选：使用半对数浓度梯度（如0.1–100 µM），计算IC50。
共培养或3D细胞模型：由于甲臜水溶性且扩散性好，CCK-8同样适用于琼脂糖、水凝胶等3D培养体系的细胞活力检测（需延长孵育时间至2–6小时）。