铁含量（亚铁嗪比色法）检测试剂盒说明书
（货号：ZK-1212F 分光法 48样）
一、产品简介：
在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，该有色物质在562nm处有特征吸收峰，进而计算得出铁含量。适用于检测组织、血清等样品中的铁含量。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 液体26mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂二 | 粉体×2支 | 4℃保存 | 用前甩几下或离心使粉体落入底部，每支再加入1.2mL的蒸馏水溶解备用。 |
试剂三 | 液体2mL×1支 | 4℃保存 |
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标准品 | 液体1mL×1支 | 4℃保存 | 临用前用试剂三稀释50倍(即取10μL的标准品至EP管中，再加490μL的试剂三)，制备成2μg/mL的铁标准品。 |
三、所需仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、可调式移液器、离心机、蒸馏水。
四、铁含量检测：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、 样本制备：
① 组织样本：
取约0.1g组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心5min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液(mL)为500~1000：1的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：
①可见分光光度计预热30min，设定波长到562nm，蒸馏水调零。
②所有试剂解冻至室温，在EP管中依次加入：
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 （仅做一次） | 空白管 （仅做一次） |
样本 | 240 |
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标准品 |
| 240 |
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蒸馏水 |
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| 240 |
试剂一 | 520 | 520 | 520 |
试剂二 | 40 | 40 | 40 |
充分混匀，置室温15min后，若浑浊则需3000rpm离心5min后取全部上清液至1mL玻璃比色皿（光径1cm）中，于波长562nm处读取各管吸光度A。 |
【注】：若A测定管大于0.8，可用蒸馏水对样本上清液进行稀释，稀释倍数D代入计算公式。
五、结果计算：
1、按照组织质量计算：
铁含量(μg/g)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V1÷V×W)×D
=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W×D
铁含量(nmol/g)= (C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V1÷V×W)×103÷Mr×D
=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W×D
2、按细胞数量计算：
铁含量(μg/104 cell)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V1÷V×细胞数量)×D
=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷细胞数量×D
铁含量(nmol/104 cell)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V1÷V×细胞
数量)×103÷Mr×D
=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷细胞数量×D
3、按照液体体积计算：
铁含量(μg/mL)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷V1×D
=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×D
铁含量(μmol/L)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷V1×103÷Mr×D
=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×D
C标准---铁标品浓度，2μg/mL； V1---加入样本体积，0.24mL；
V---提取液体积，1mL； W---样本取样质量，g；
细胞数量---细胞数量，若取500万则把500代入公式计算；
D---稀释倍数，未稀释即为1； Mr---铁分子量，55.847。