血清总铁结合力(Total Iron Binding Capacity，TIBC)试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力，其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。
测定原理：
Fe2+与菲洛嗪反应形成紫红色化合物，在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下，血清转铁蛋白可以与Fe3+结合，剩余未结合的Fe3+可以被还原成Fe2+，此时吸光度A1与未结合Fe3+数量正相关；酸化后，转铁蛋白结合的Fe3+释放，并且进一步被还原 Fe2+，此时吸光度A2与总Fe3+数量正相关。A2减A1与TIBC浓度呈正比。
自备实验用品及仪器：
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。（临用前根据用量将A液和B液按1:1混合）
试剂四：液体 7mL×1 瓶，4℃保存。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至562nm。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
血清（μL） |
| 40 |
试剂一（μL） | 320 | 280 |
试剂二（μL） | 40 | 40 |
混匀，37℃，10min |
试剂三（μL） | 40 | 40 |
混匀，37℃，5min，对照管调零，取200μL于微量石英比色皿/96孔板测定562nm 处吸光值A1，测完后立即加入试剂四 |
试剂四（μL） | 60 | 60 |
混匀，37℃，5min，对照管调零，取200μL于微量石英比色皿/96孔板测定562nm处吸光值A2。ΔA=A2-A1。 |
血清总铁结合力计算公式：
总铁结合能力定义：37℃条件下，每升血清结合Fe3+的μmol数。
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.5478x+0.0281，R2=0.9981
总铁结合能力TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.5478×V反总÷V样=20.99×（ΔA-0.0281）
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.2739x+0.0281，R2=0.9981
总铁结合能力TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.2739×V反总÷V样=41.98×（ΔA-0.0281）
V 反总：反应总体积，0.46mL；V 样：反应中样本体积，0.04mL
注意事项：
1. 吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2. 试剂二、试剂三有一定的毒性，操作时请做好防护措施。
3. 检测限为4.78μmol/L。