多功能氧化酶（(mixed function oxidase，MFO）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
多功能氧化酶又称混合功能氧化酶，可产生降解反应，可使原化学物质变为低毒的或无毒的
物质从体内排出；还可产生激活反应，可使原化学物质转化为具有亲电子性质，导致毒性增强，成为致突变物或终致癌物。近年来对混合功能氧化酶系与外源性化学物质相互作用的深入研究，对于从分子生物学水平上进一步了解外源性化学物质的毒作用具有重要意义。
测定原理：
MFO 催化对硝基苯甲醚产生对硝基苯酚，在 405nm 下有特征吸光值。
自备用品：
分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存;
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃避光保存;
试剂二：粉剂×3 管，-20℃避光保存；临用前取一管加入 1mL 水溶解，现配现用。
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液（mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提
取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。
2、 在玻璃比色皿中，加入 500μL 试剂一和 450μL 粗酶液，混匀，30℃温育 5min，再加入
50μL 试剂二，立刻混匀并记录405nm 下初始吸光值A1，30℃温育30min 后再测定405nm
下吸光值 A2。ΔA=A2-A1。
MFO 活性计算:
标准曲线：y = 0.0074x + 0.0025，R2 = 0.9991；y，吸光度；x,标准品浓度，单位 nmol/mL。
（1） 按样本质量计算
单位定义：每 g 样本每分钟产生 1nmol 对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
MFO（nmol/min/g 鲜重）=（△ A-0.0025）÷0.0074×V 标÷(V 样÷V 样总×W)÷T
=4.504×（△ A-0.0025）÷W
（2） 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟产生 1nmol 对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
MFO（nmol/min/mg prot）=（△ A-0.0025）÷0.0074×V 标÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T
=4.504×（△ A-0.0025）÷Cpr
V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，450μL；V 标：加入标准品体积 ，
450μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。
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