本蛋白酶K不含DNase,不含RNase,无核酸残留。本蛋白酶K酶活力≥30U/mg,纯度≥95% (电泳)。在pH7.5、37℃,以血红蛋白为底物,1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量,定义为一个单位蛋白酶K酶活力。本蛋白酶K在很宽的pH范围内有效,有效的pH范围为pH4.0-12.5,pH范围为pH7.5-8.0。蛋白酶K的反应温度为65℃,但在65℃或更高温度时,蛋白酶K自身也会非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。在0.2-1% SDS或约10mM尿素存在的情况下,蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml,根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。常用浓度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。由于蛋白酶K属于一种广谱丝氨酸蛋白酶,所以可被某些丝氨酸蛋白酶的抑制剂如PMSF、AEBSF等所抑制。
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