aladdin 阿拉丁 S266352 Super Fluor 680琥珀酰亚胺酯 90%

Super Fluor 680活化酯的性质参数
活化酯分子量:1150
最大吸收波长(nm):680
摩尔吸光系数(M-1cm-1):184000 
最大发射波长(nm):702
A280nm /Amax:5%
Super Fluor 标记抗体的参考方案
1) 蛋白溶解：用0.1 M NaHCO3溶解至终浓度为2mg/mL
将1ml 去离子水加入84mgNaHCO3瓶中，配成1M 的碳酸氢钠溶液。振荡或吹打至完全溶解。该溶液pH 约8.3，2～6℃保存可用2 星期；若抗体是溶液，将抗体稀释至2mg/mL，再加入1/10 体积的上述碳酸氢钠溶液；若抗体是冻干粉，将1M 碳酸氢钠溶液用10 倍去离子水稀释成0.1M 后，用其将抗体溶成2mg/mL的溶液；
2）染料溶解：活化Super Flour SE染料固体粉末从冰箱放入干燥器中慢慢升至常温后，用无水DMSO将染料配置浓度为1 mg/mL。
3）标记：在1mL蛋白溶液中缓慢加入适量染料溶液，（蛋白:染料摩尔比=1:20～50；质量比可在以下范围内优化10～200ug Super Flour SE 每毫克IgG抗体）。同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。也可以直接将蛋白溶液直接加入染料的固体粉末的试剂瓶中，同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。
4）纯化：用透析法或者葡聚糖Sephadex纯化产品后，产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM叠氮化钠溶液中，-20℃避光储存。
5）贮存：标记好的蛋白贮存于2～6℃，避光。若纯化的蛋白偶联物浓度小于1mg/mL，加入BSA 或其他稳定蛋白1～10mg/ml。在2mM 叠氮钠存在的情况下，2～6 度可保存几个月。保存更长时间，则需分装后-20℃保存。避免反复冻融，避光保存。
计算标记比例F/P值
对于IgG 等大多数抗体来说，摩尔吸光系数为203000，F/P值在4～9 之间是最合适。
Super Flour 680标记蛋白F/P值计算：
1）用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白，在1cm比色皿中测定280nm和680nm的光吸收
2）计算样品中的蛋白浓度：蛋白摩尔浓度=(A280-(A650×0.05))×稀释倍数/203000
3）计算标记比例：每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A650×稀释倍数/(184000×蛋白摩尔浓度)
活性染料稳定性与储存
请注意：未开封的粉末在避光干燥-20℃可存放6个月。其水溶液现配现用不能储存。任何溶解后的染料最好立即使用；无水的DMSO溶液-20°C保存最多2个星期。