探讨 Bufalin 对人白血病细胞系 K562/VCR 中长春新碱获得性多药耐药 （MDR） 的逆转作用。方法和结果：通过甲基噻唑基四唑测定法测定蟾牛素的增殖抑制率和逆转指数 （RI）。流式细胞术 （FCM） 测定 K562/VCR 细胞中阿霉素 （ADM） 的摄取、细胞周期和细胞凋亡率。用 Wright-Giemsa 染色观察到细胞形态学变化。免疫细胞化学检测 P-glycoprotein （P-gp） 、多药相关蛋白-1 （MRP1） 、 Bcl-xL 和 Bax 蛋白的表达。人白血病多重耐药 K562/VCR 细胞对 Bufalin 无交叉耐药性。Bufalin 在 0.0002 、 0.001 和 0.005 μmol/L 浓度下的 RI 分别为 4.85 、 6.94 和 14.77。0.001 μmol/L Bufalin 预孵育 2 h 可使细胞内 ADM 荧光强度提高至 28.07% （P < 0.05） 并同时下调 MRP1 表达，但对 P-gp 蛋白无显著影响。细胞周期分析显示 Bufalin 处理后细胞凋亡率增加和 G2/M 期比例明显降低。当暴露于 0.01 μmol/L 蟾蜍灵时，可观察到细胞凋亡的典型形态学变化。免疫细胞化学可检测 K562/VCR 细胞中 Bcl-xL 的下调和 Bax 表达的上调。结论：Bufalin 可部分逆转 K562/VCR 细胞的 MDR，可能通过改变 Bcl-xL/Bax 比值下调 MRP1 表达和激活细胞凋亡途径。
蟾蜍素是中药的一种活性成分 chan'su，可诱导人白血病 U937 细胞的典型细胞凋亡。方法和结果：当在没有血清的情况下用 10 （-8） M Bufalin 处理 U937 细胞时，丝裂原活化蛋白 （MAP） 激酶活性在处理开始后 6 h 显着增加，并在 12 h 内升高。在 MAP 激酶激活之前，发现 Ras、Raf-1 和 MAP 激酶激酶的活性增加，但这些酶被 Bufalin 处理瞬时激活。这些结果表明，信号从 Ras、Raf-1 和 MAP 激酶依次传递到 MAP 激酶。与这种信号转导相关，细胞中 cAMP 的浓度显着降低，表明 Raf-1 也因蛋白激酶 A 磷酸化程度的降低而被激活。事实上，用毛喉素和 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤预处理 U937 细胞，已知它们会增加细胞中 cAMP 的浓度，随后用蟾蜍素处理导致 Raf-1 活性和 DNA 片段化降低。为了确认 MAP 激酶参与凋亡过程，在 U937 细胞中表达 MAP 激酶激酶 1 的反义 cDNA。转化体对响应 Bufalin 的 DNA 片段化和细胞死亡均具有显著抗性。结论：我们的研究结果表明，响应 Bufalin 的 U937 细胞中 MAP 激酶持续激活的通路是参与诱导细胞凋亡的至少信号转导通路之一。
蟾蜍素是中药 Chan Su 中的一种活性化合物，已被证明可诱导多种癌细胞类型的细胞凋亡。然而，已知某些胃癌细胞对 Bufalin 具有耐药性。细胞内分泌的酸性且富含半胱氨酸的蛋白 （SPARC） 调节增殖和细胞凋亡。本研究旨在评估 SPARC 在 Bufalin 诱导的 SGC7901 和 MGC803 胃癌细胞凋亡中的作用。方法和结果：SGC7901 高 SPARC 表达的细胞比低 SPARC 表达的 MGC803 细胞对蟾蜍素更耐药。这种耐药性被小干扰 （si） RNA 介导的 SPARC 敲低显着逆转。此外，结果表明 SPARC 通过保护线粒体完整性、减少细胞质细胞色素 c 的释放和增加 Bcl-2/Bax 的比率来负向调节 Bufalin 诱导的内源性细胞凋亡。此外，SPARC 通过增加 Cyclin B1 和 Cyclin A 蛋白表达水平克服了 Bufalin 诱导的 G2/M 期阻滞。SPARC 还激活细胞存活信号，包括 Src 和 Akt，但不激活细胞外信号调节激酶。结论：本研究证明，SPARC 通过抑制内在细胞凋亡途径、抑制细胞周期停滞和激活参与增殖的某些途径来拮抗蟾牛素诱导的细胞凋亡。这为 SPARC 作为使胃癌细胞对 Bufalin 敏感的潜在靶点提供了新的证据。
几乎所有转录因子都与共激活因子合作，这些激活因子募集染色质重塑因子并与基础转录机制相互作用。共激活因子与癌细胞增殖、侵袭和转移有关，包括由 SRC-1 （NCOA1）、SRC-2 （TIF2/GRIP1/NCOA2） 和 SRC-3 （AIB1/ACTR/NCOA3） 组成的 p160 类固醇受体共激活因子 （SRC） 家族。鉴于它们广泛参与许多癌症，它们代表了新化疗药物的候选分子靶点。在这里，我们报告了一项高通量筛选工作的结果，该筛选工作确定了强心苷 Bufalin 作为 SRC-3 和 SRC-1 的有效小分子抑制剂。蟾蜍素强烈促进 SRC-3 蛋白降解，并能够在纳摩尔浓度下阻断癌细胞生长。当掺入纳米颗粒递送系统时，Bufalin 能够减少乳腺癌小鼠异种移植模型中的肿瘤生长。我们的工作确定 Bufalin 是一种潜在的广谱癌症小分子抑制剂。
强心苷可在癌症中诱导溶瘤作用。本研究旨在评估 Bufalin 和 cinobufagin 对名为 LNCaP 、 DU145 和 PC3 的前列腺癌细胞系增殖的影响。方法和结果：通过 MTT 法测量细胞增殖。通过乳酸脱氢酶测定细胞毒作用。细胞内钙浓度 （[Ca（2+）]（i）） 由双波长光谱仪系统测量。进行 TUNEL 测定和流式细胞术以测量凋亡细胞的百分比。比色测定法用于测量 caspase 活性。培养 2-4 天后，Bufalin 和 cinobufagin 以 0.1、1 或 10 μM 的剂量抑制癌细胞的增殖。Bufalin 和 cinobufagin 对 DU145 和 LNCaP 细胞的细胞毒性呈剂量依赖性。培养 24 小时后，蟾蜍素或蟾蜍素增加癌细胞中的 [Ca（2+）]（i） 和细胞凋亡，以及 DU145 和 PC3 细胞中的半胱天冬酶 3 活性以及 LNCaP 细胞中的半胱天冬酶 9 活性。结论：Bufalin 和 cinobufagin 可能抑制与 [Ca（2+）]（i） 和细胞凋亡持续升高相关的前列腺癌细胞系的增殖。
CAS 465-21-4对应的化学物质是蟾毒灵（Bufalin），以下是对其的详细介绍：
中文名称：蟾毒灵
英文名称：Bufalin
CAS号：465-21-4
分子式：C24H34O4
分子量：386.52（也有资料给出为386.532，可能因计算精度而略有差异）
外观：白色至灰白色固体
熔点：242~243°C
沸点：556.6±50.0°C（预测值）
密度：1.226±0.06g/cm3（预测值）或1.2±0.1g/cm3（另一种预测值）
闪点：189°C或189.0±23.6°C（预测值）
溶解性：在DMSO、DMF、Ethanol等溶剂中有一定的溶解度
酸度系数（pKa）：15.01±0.70（预测值）
稳定性：按规格使用和贮存，不会发生分解，但需避免与氧化物接触
来源：蟾毒灵主要来源于蟾蜍科动物如中华大蟾蜍（Bufo bufo gargarizans Cantor）或黑眶蟾蜍（Bufo melanostictus Schneider）的干燥分泌物，是蟾酥中的主要免疫活性成分之一。
药理作用：
具有明确的抑制血管内皮细胞增殖和抗血管生成的作用。
是有效的Na+/K+-ATPase抑制剂，可与其亚基α1、α2和α3结合，Kd值分别为42.5 nM、45 nM和40 nM。
具有抗肿瘤活性，体外水平对多种癌细胞有抑制作用。
具有很强的表面麻醉作用，作用比可卡因强而持久。
对呼吸有兴奋作用，能拮抗吗啡的呼吸抑制。
用途：
用于含量测定、鉴定、药理实验等。
在医药领域具有潜在的应用价值，如抗癌药物的研发等。
应在2~8°C的温度下保存，放置于通风、干燥的地方，避免与其他氧化物接触。
危险性：蟾毒灵属于有毒物质，具有急性经口毒性。
危险标志：GHS06、T+等。
安全说明：应遵守相关的安全操作规程和防护措施，如佩戴防护手套、眼镜等。在接触或处理蟾毒灵时，应避免吸入、食入或皮肤接触。如发生误食或皮肤接触等情况，应立即就医并遵循医生的指导进行处理。
综上所述，蟾毒灵是一种具有重要药理作用的化学物质，在医药和科研领域具有广泛的应用前景。但在使用和处理过程中需要严格遵守相关的安全规定和操作规程以确保人员和环境的安全。
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刘盼盼