总蛋白检测试剂盒（双缩脲比色法）
简介：
总蛋白(Total Protein，TP)可分为白蛋白和球蛋白两类，在机体中具有重要的生理功能，血清总蛋白的测定是临床生化检验的重要项目之一。血清蛋白具有维持血液正常胶体渗透压和pH、运输多种代谢物、调节被运输物质的生理作用和解除其毒性、免疫作用以及营养作用等多种功能。血清总蛋白不仅可用于机体营养状态的监测，还可用于疾病的诊断及鉴别诊断。对于生物体液（血清、尿液、脑脊液）中总蛋白质含量的测定，目前通常使用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。
BIOISCO总蛋白检测试剂盒（双缩脲比色法）多用于测定人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量。双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长。双缩脲法测定蛋白质测定范围能够是1~10 mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好， 双缩脲试剂可以长期保存。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
产品名称 | KB024-120T | Storage |
试剂(A)：双缩脲试剂 | 250ml | 4℃ |
试剂(B)：蛋白标准溶液（20 mg/ml） | 1ml | -20℃ |
说明书 | 一份 |
保存条件：
试剂(A)：双缩脲试剂4℃保存，一年有效，试剂(B)：蛋白标准溶液（20 mg/ml）室温保存，蛋白标
准配制成溶液后应-20℃保存。
自备材料：
离心管或小试管
2、 水浴锅或恒温箱
3、 比色杯
4、 分光光度计
操作步骤（仅供参考）：
1、 蛋白标准溶液(20 mg/ml)按自己试验要求用稀释液进行稀释，如稀释至1 mg/ml。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。一般也可以用NaCl或PBS作为溶解总蛋白标准品的稀释液。
2、 样本处理：血清、血浆样本直接取检测。对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水比例，加入生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。
3、 TP加样操作，按下表依次加入试剂：
加入物（ml） | 空白管 | 标准管 | 待测管 |
ddH2O | 0.04 |
|
|
蛋白标准溶液(如 1mg/ml) |
| 0.04 |
|
待检样品(血清、血浆、组织匀浆液) |
|
| 0.04 |
双缩脲试剂 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
4、 混匀，孵育。
5、 比色杯光径，分光光度计测定波长处的吸光度，如无，之间的波长也可。以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
6、 当遇到浑浊或溶血样本等，应设“样本空白管”：取待测样品加入双缩脲空白试剂，以双缩脲空白试剂调零，读取样本空白管吸光度。用待测管吸光度减去样本空白管吸光度后的净吸光度，计算总蛋白浓度。
计算：
总蛋白(g/L)=(待测管吸光度/标准管吸光度)×蛋白标准液浓度(g/L)
注意事项：
1、 蛋白标准粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
2、 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置1 h或60℃放置15 min，颜色会随着时间的延长不断加深。
3、 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有铜离子螯合剂。
4、 如果没分光光度计，也可以使用酶标仪测定。使用酶标仪测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著增加。
5、 检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
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