双缩脲法蛋白质含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定,确保蛋白浓度在1~10mg/ml范围内。
测定意义:
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理:
强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物;紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。该方法测定范围为1~10mg蛋白质,适用于蛋白质浓度高的样品,尤其是动物材料。
自备仪器和用品:
离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。
样品中可溶性蛋白质提取提取:
1、液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。
2、组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水))
冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即待测液。(动物样品常常需要稀释)
3 、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
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