FLAG peptide,即FLAG多肽,是一种由八个氨基酸组成的多肽,其序列为Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys(单字母表示为DYKDDDDK)。以下是对FLAG peptide的详细描述:
分子式与分子量:FLAG peptide的分子式通常为C41H60N10O20(也有资料给出略有差异的分子式,如C49H69N15O12,这可能是由于不同合成条件或后处理步骤导致的),平均分子量约为1012.97 Da(精确分子量可能略有差异)。
等电点:等电点(PI)约为4.51(也有资料给出4.16的等电点值,这同样可能是由于实验条件或测定方法的差异)。
电荷特性:在生理pH条件下,FLAG peptide带有显著的负电荷,这主要归因于其序列中多个带负电荷的天冬氨酸残基。
亲水性:FLAG peptide具有良好的亲水性,这与其富含极性氨基酸(如天冬氨酸和赖氨酸)有关。
线性结构:FLAG peptide通常以线性结构存在,其序列中的氨基酸残基通过肽键连接。
肠激酶切割位点:FLAG peptide的C末端五个氨基酸残基(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)是肠激酶的特异性识别位点,这使得在需要时可以通过肠激酶处理将FLAG标签从融合蛋白上切除。
抗原表位标签:FLAG peptide是一种常用的抗原表位标签,可以通过基因工程技术融合到目标蛋白的N端、C端或其他合适的位置。这样,目标蛋白就能够被抗FLAG抗体特异性识别和结合,从而方便后续的蛋白质检测、纯化和定位等研究。
蛋白质纯化:利用抗FLAG抗体或亲和树脂,可以高效地捕获和纯化带有FLAG标签的融合蛋白。这种方法适用于从复杂样品(如细胞裂解液、组织提取物或发酵液)中分离目标蛋白。
蛋白质检测与鉴定:通过Western印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫荧光、免疫共沉淀等免疫学方法,可以检测和定量分析带有FLAG标签的融合蛋白。
蛋白质功能研究:由于FLAG标签通常不会改变蛋白质的自然构象和功能,因此可以在不干扰蛋白质生物学活性的前提下,对其进行后续的功能性研究。
储存条件:FLAG peptide应在干燥、低温条件下储存,以保持其活性和稳定性。通常建议储存在-20℃或更低温度下。
避免反复冻融:为避免反复冻融对肽段造成损伤,建议将FLAG peptide分成小份保存,每次使用时取出一份,用完即弃。
综上所述,FLAG peptide作为一种高度特异性和识别性的多肽标签,在蛋白质科学研究领域具有广泛的应用前景。
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