谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。GST 是体内解毒酶系统的重要组 成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合,使亲电化合物变为亲水物质,易 于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此,GST 在保 护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外,因为 GST 具有 GSH-Px 活性,亦称为 non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如 DNA、蛋白质等的功能。
注意,GST 催化的反应减少 GSH 含量,但是不增加 GSSG 含量。
测定原理:
GST 催化 GSH 与 CDNB 结合,其结合产物的光吸收峰波长为 340nm;通过测定 340nm 波长处吸光度 上升速率,即可计算出 GST 活性。自备
仪器和用品:
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml 石英比色皿和蒸馏水。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 试剂 一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(10 4个):试剂一体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加 入 1ml 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g, 4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。3. 血清等液体:直接测定。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 340 nm,用蒸馏水调零。
2. 试剂三放在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)保温。 3. 测定管:取 1ml 石英比色皿,加入 100μl 上清液,900μl 试剂二和 100μl 试剂三,迅速混匀后于 340nm 测定吸光度变化,记录 10 s 和 310 s 吸光度为 A1 和 A2。
关键字: 谷胱甘肽S-转移酶(GST)检测试剂盒;
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