谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中GR被TrxR取代)。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH,有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
测定原理:
GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH,同时NADPH脱氢生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在该波长无吸收峰;通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率,从而计算GR活性。
组成:
产品名称 | GSH011-50T/48S | Storage |
试剂一:液体 | 100ml | 4℃ |
试剂二:粉剂 | 2瓶 | -20℃ |
试剂三:粉剂 | 2支 | -20℃ |
说明书 | 一份 |
试剂二:粉剂×2瓶,-20℃保存。临用前加入3 ml蒸馏水,混匀。
试剂三:粉剂×2支,-20℃保存。临用前加入1.5 ml蒸馏水,混匀。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1ml石英比色皿和蒸馏水
粗酶液提取:
组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。
细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心15min,取上清置于冰上待测。
血清等液体:直接测定。
操作步骤:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂一置于25℃(普通物质)或者37℃(哺乳动物)中预热30min。
3. 测定管:取1ml石英比色皿,依次加入50μl试剂三,100μl试剂二, 750μl试剂一,100μl上清液,混匀,于340nm迅速测定初始吸光度和180 s吸光度,记为A测1和A测2,△A测定管= A测1﹣A测2。(注意加完上清液后迅速混匀测定)
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关键字: 谷胱甘肽还原酶;谷胱甘肽还原酶(GR)检测试剂盒;
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