乳酸含量(lactic acid,LA)试剂盒说明书
微量法 100T/48S
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切 相关,乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理:
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸,同时使 NAD+还原生成 NADH 和 H+,H+传递给 PMS 生成的 PMSH2还原 INT 生成红色物质,在 530nm 处有特征吸收峰。
自备仪器和用品:
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
样本处理:
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1ml 提取液)加入 6 提取液,冰浴匀浆后于 4℃,12000g 离心 10min,取上清测定。
2. 细胞:按照细胞数量(10 4个):提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1ml 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);于 4℃,12000g 离心 10min,取上清测定。
3. 血清:直接测定。
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