过氧化氢含量(H2O2)试剂盒说明书
分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
H2O2是生物体内最常见的活性氧分子,主要由 SOD 和 XOD 等催化产生,由 CAT 和 POD 等催化降 解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化 细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面 H2O2 也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。
测定原理:
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在 415nm 有特征吸收。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml 玻璃比色皿、丙酮 60ml、浓盐酸 10ml、研钵和 冰。
H2O2提取:
1、细菌或细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 试剂一),超声波破碎 细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);用试剂一定容至 1ml;8000g 4℃ 离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、 组织样品的制备:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组 织,加入 1ml 试剂一)进行冰浴匀浆;转移至 EP 管中,用试剂一定容至 1ml,8000g 4℃离心 10min,取 上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司
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