商品属性
产品名称 | 过氧化氢（H2O2）测试盒 | 产品货号 | BH-961150 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
过氧化氢（H₂O₂）是一种重要的活性氧（ROS）分子，在生物体内具有双重作用：生理功能：
参与细胞信号转导，调节细胞增殖、分化和凋亡
作为免疫防御分子，参与病原体杀伤
调节氧化还原平衡，维持细胞稳态病理意义：
过量产生会导致氧化应激，引起细胞膜损伤、DNA氧化、蛋白质变性
与多种疾病相关，如心血管疾病、神经退行性疾病、肿瘤、糖尿病等
作为环境胁迫指标，反映植物对干旱、盐渍、重金属等逆境的响应
测定原理
采用钼蓝比色法，H₂O₂与钼酸铵在酸性条件下反应生成黄色的钼酸络合物： H2O2+(NH4)2MoO4→H+MoO3⋅H2O2H2O2+(NH4)2MoO4H+MoO3⋅H2O2 黄色络合物在405nm处有特征吸收峰，吸光度与H₂O₂浓度成正比。
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂一 25mL×1瓶/50mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.4，用于样本提取
试剂二 10mL×1瓶/20mL×1瓶 含0.1mol/L钼酸铵溶液，显色剂
试剂三 10mL×1瓶/20mL×1瓶 含0.5mol/L硫酸溶液，酸性介质
试剂四 1mL×1支/2mL×1支 含100mmol/L H₂O₂标准品，用于建立标准曲线
提取液 100mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.4，用于样本提取
自备仪器与试剂
必备仪器
可见分光光度计/酶标仪（405nm检测通道）
低温离心机（≥8000g）
恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）
可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
研钵/组织匀浆器（冰浴专用）
必备耗材
1mL玻璃比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
手术剪/镊子（用于组织样本处理）
自备试剂
蒸馏水/去离子水
生理盐水（0.85% NaCl）
抗凝剂（肝素/EDTA，仅用于血浆样本）
样本前处理方法
动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL预冷提取液，冰浴匀浆8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测若H₂O₂浓度过高，可用提取液稀释1-5倍后测定
细菌/细胞样本收集对数生长期细菌/细胞，8000g 4℃离心5min弃上清按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)=500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测
液体样本（血清/血浆/尿液/脑脊液等）血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取血清上清血浆样本：加入抗凝剂（肝素/EDTA）后3000g 4℃离心10min，取上清尿液/脑脊液：新鲜样本3000g 4℃离心10min，取上清样本可直接检测，无需提取处理；浓度过高时可用生理盐水稀释
测定操作步骤
分光光度法操作
试剂准备：
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存
试剂二：液体10mL×1瓶，-20℃保存，用时加10mL蒸馏水溶解
试剂三：液体10mL×1瓶，-20℃保存，用时加10mL蒸馏水溶解
工作液：试剂一5.0mL + 试剂二0.2mL + 试剂三0.2mL，现配现用
标准品稀释：将试剂四（100mmol/L H₂O₂标准品）用蒸馏水稀释成0、2、4、6、8、10μmol/L的标准系列
标准曲线绘制：
取比色皿，依次加入标准品溶液100μL + 工作液900μL
混匀，室温放置10min，405nm波长下测定吸光度
以H₂O₂浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线
样本测定：
分光光度计预热30min，调节波长到405nm，蒸馏水调零
取比色皿，依次加入样本100μL + 工作液900μL
混匀，室温放置10min，测定吸光度（A样）
空白管：提取液100μL + 工作液900μL，相同方法测定吸光度（A空）
微量法（酶标仪）操作96孔板每孔加入：工作液90μL + 样本10μL室温放置10min，405nm波长下测定吸光度同时绘制标准曲线，根据标准曲线计算H₂O₂浓度
含量计算方法
计算公式
H2O2浓度(μmol/g鲜重)=C×V总×DWH2O2浓度(μmol/g鲜重)=WC×V总×D H2O2浓度(μmol/mL)=C×DH2O2浓度(μmol/mL)=C×D
C：从标准曲线上查得的H₂O₂浓度（μmol/L）
V总：样本提取液总体积（mL）
D：样本稀释倍数（未稀释则为1）
W：组织鲜重（g）
简化公式
组织样本：H₂O₂（μmol/g鲜重）= (A样 - A空) × 0.01 × V总 ÷ W
液体样本：H₂O₂（μmol/mL）= (A样 - A空) × 0.01
性能指标
指标 要求
线性范围 0~10μmol/L，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.1μmol/L
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 4℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免H₂O₂分解；-80℃可保存1个月
匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃
样本需避免氧化，处理过程中尽量减少与空气接触
试剂使用：
钼酸铵溶液对光敏感，配制后需避光保存
标准品需现配现用，避免H₂O₂分解
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
室温放置时间需严格控制在10min，避免显色过度
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
每个样本需设置平行实验，结果取平均值
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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