α-淀粉酶 (α-amylase ,α-AL) 试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
淀粉酶负责水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2. 1. 1)可随机地作用于淀粉中的α- 1,4- 糖苷键,生成葡萄糖 、麦芽糖 、麦芽三糖 、糊精等还原糖, 同时使淀粉的粘度降低, 因此又称为液化酶。
测定原理:
还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质 。β-淀粉酶不耐热,若酶可耐受的情况下,在 70℃钝 化 15min ,从而测定α-淀 粉酶活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计 、恒温水浴锅 、 台式离心机 、可调式移液器 、玻璃比色皿 、研钵和蒸馏水。
粗酶液制备:
组织:称取 0. 1~0.2g 样本 (建议称取约 0. 1g 样本) ,加 1 mL 蒸馏水匀浆;将匀浆倒入离心管中,在 室温下放置提取 15min ,每隔 5min 振荡 1 次 ,使其充分提取;3000g,25℃离心 10min ,吸取上清液并且 加蒸馏水定容至 10 mL,摇匀,即为淀粉酶原液。
血清 (浆) :直接检测。
操作步骤和加样表 (在 1.5mLEP 管中依次加入下列试剂) :
1 、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 540 nm,蒸馏水调零。
2 、试剂一或试剂二 40℃预热 10min
3、测定步骤
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