在生物实验研究中使用包括2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷和乳糖的两种底物测量β-半乳糖苷酶活性,通过遵循从2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷释放的邻硝基苯酚的量来测量2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷的β-半乳糖苷酶活性。反应混合物由100μL酶溶液和400μL2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷溶液(2.5g/L,在pH6.8的100mM Tris-HCl缓冲液中)组成,在78度下温育15分钟后,通过加入等体积的1M碳酸钠以终止反应。β-半乳糖苷酶对2-硝基苯-beta-D-半乳糖苷具有高水解能力(100%),对其天然底物乳糖具有中等活性(25.7%)。然而,酶对所有其他生色硝基苯类似物的水解能力非常弱,表明Gal308是具有窄底物特异性的β-半乳糖苷酶。需要说明的是一个活性单位定义为在测定条件下每分钟产生1μmol邻硝基苯酚所需的酶量,比活性表示为每毫克蛋白质的单位。在含有100μL酶溶液和5%乳糖的相同缓冲液中进行对乳糖活性的测定,并通过煮沸10分钟终止反应,并使用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶测定试剂盒测定葡萄糖浓度。[1]
苏州络森生物科技有限公司
联系商家时请提及chemicalbook,有助于交易顺利完成!
络森生物