植物铵态氮试剂盒说明书
微量法100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
氮素是构成生物体的一种必需元素，自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮，经过硝化微生物的作用转化成硝态氮，后者被植物或微生物同化成有机氮化物，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
测定原理：
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应， 缩合生成蓝紫色物质，在580nm处有特征吸收峰。
组成：
产品名称 | NM020-100T/96S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 9ml | 4℃ |
试剂二：粉剂 | 1瓶 | 4℃避光 |
试剂三：液体 | 15ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1.5ml蒸馏水充分溶解。
自备仪器和用品：
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
样本处理：
按照质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，室温匀浆后于25℃，12000g离心10min，取上清待测。
测定操作表：
| 空白管 | 测定管 |
样本（μl） |
| 60 |
蒸馏水（μl） | 60 |
|
试剂一（μl） | 90 | 90 |
试剂二（μl） | 15 | 15 |
充分混匀，沸水浴5min后自然冷却10min |
试剂三（μl） | 150 | 150 |
充分混匀，取200μl于微量石英比色皿/96孔板中测定580nm处吸光值A，△A=A测定管-A空白管 |
注意：空白管只需测定一次。
计算公式：
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.1535x-0.0279，R2=0.9993
NH4+—N含量（μg/g 鲜重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反总÷（W×V样÷V样总）
= 32.9×（△A+0.0279）÷W
V反总：反应总体积，0.315ml；V样：反应体系中加入样本体积，0.06ml；V样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，g
用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0768x-0.0279，R2=0.9993
NH4+—N含量（μg/g 鲜重）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V反总÷（W×V样÷V样总）
= 65.8×（△A+0.0279）÷W
V反总：反应总体积，0.315ml；V样：反应体系中加入样本体积，0.06ml；V样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，g
注意事项：
提取好的待测液尽快测定，低温保存不得超过24小时。
沸水浴时间不宜过长，否则会对测定结果有影响。
显色后20min内完成测定。
最低检出限为18μg/g。
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