糜蛋白酶（Chymotrypsin）试剂盒说明书
微量法100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。
测定原理：
糜蛋白酶催化ATEE水解，产物在237 nm有特征光吸收；通过测定237 nm 光吸收变化速率，来计算糜蛋白酶活性。
组成：
产品名称 | PI012-100T/96S | Storage |
试剂一：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂二：粉剂 | 1瓶 | 4℃避光 |
说明书 | 一份 |
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入20 ml蒸馏水充分溶解。
自备仪器和用品：
台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
测定步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到237 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中保温30min。
3. 空白管：取96孔板，加入20μl试剂一，200μl试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为△A空白管。（从吸光值稳定增加开始计时）
4. 测定管：取96孔板，加入20μl粗酶液，200μl试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为△A测定管。（从吸光值稳定增加开始计时）
注意：空白管只需要测定一次。
糜蛋白酶活性计算公式：
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶（U/mg prot）= (△A测定管－△A空白管) ×V反总÷(Cpr×V1)÷T
=5.5×(△A测定管－△A空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶（U/g 鲜重）=(△A测定管－△A空白管) ×V反总÷(W×V1÷V2)÷T
=5.5×(△A测定管－△A空白管)÷W
W：样品质量（g）；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/ml），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（ml），20μl=2×10-2 ml；V2：粗酶液总体积（ml），1 ml；V反总：反应总体积，220μl=0.22ml； T：反应时间（min），4min。
注意事项：
临用前配制的试剂配置好后3天内使用完毕。
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伊势久（江苏连云港）生物科技有限责任公司，成立于2019年，坐落于新亚欧大陆桥东方桥头堡连云港市。公司由资深行业专家和双一流高校博士联合创办，主要从事生化检测、病理检测和原料酶等相关试剂的研发和生产。
我司位于联东U谷科技创新谷内的2000平米的生产、研发基地已建成投入运行，其中包括150平米的超十万级的洁净车间。我司坚持以自主研发为核心，现已生产出的脲酶、tRNA转运核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制剂等产品，热销市场以来收到了客户的广泛好评。
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