α-淀粉酶(α-amylase，α-AL)试剂盒
(微量法100T/48S)
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-AL(EC3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解，生
成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
测定原理：
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540nm有
吸收峰；通过测定540nm吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化
15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、
研钵和蒸馏水。
粗酶液提取:
组织：称取0.1~0.2g样本(建议称取约0.1g样本)，加1mL蒸馏水匀浆；将匀浆倒入离心管
中，在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，吸取
上清液并且加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
血清(浆)：直接检测。
操作步骤和加样表(在EP管中依次加入下列试剂)：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。
2、试剂一和试剂二40℃预热10min。
α-淀粉酶活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x-0.1778；x为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值。
2、α-淀粉酶活性
(1)按照样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=
1.075×(ΔA＋0.1778)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mgprot)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA
＋0.1778)÷Cpr
(3)血清(浆)样本中α-淀粉酶活性计算
单位定义：每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T=0.1075×(ΔA＋0.1778)
反总：反应体系总体积，0.15mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V样总：提取液总体
积，10mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归曲线为y=2.481x-0.1778；x为标准品浓度(mg/mL)，y为吸光值。
2、α-淀粉酶活性
(1)按照样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=
1.612×(ΔA＋0.1778)÷W
(2)按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(mg/min/mgprot)=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=0.1612×(ΔA
＋0.1778)÷Cpr
(3)血清(浆)样本中α-淀粉酶活性计算
单位定义：每mL血清(浆)每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
关键字： α-淀粉酶（α-AL）检测试剂盒;
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