α-淀粉酶(α-AL)测定试剂盒/微量法/48样
测定意义:
淀粉水解酶,包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中 α-1,4-糖苷键水解,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
测定原理:
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖,还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质,在 540 nm有吸收峰;通过测定 540 nm 吸光度增加速率,计算淀粉酶活性。α-AL 耐热,但是 β-淀粉酶可在 70℃钝化 15min。因此粗酶液经过 70℃钝化 15min ,就只有 α-AL 能够催化淀粉水解。
需自备的的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。测定步骤:
试剂(μL)
对照管
测定管
α-淀粉酶原液
75
70℃水浴 15min 左右,流水冷却。
蒸馏水
试剂二
在 40℃恒温水浴中准确保温5min
试剂一
150
混匀,95 度水浴 5min ,冷却,取 200 μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中,540nm 处读取吸光值,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。
注 意:
正式测定前请取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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