蔗糖合成酶（合成方向；SS-Ⅱ）试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其合成方向SS-Ⅱ的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。
测定原理：
SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
组成：
产品名称 | SC006-100T/48S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 2.5ml | -20℃ |
试剂二：蔗糖溶液 | 10ml | 4℃ |
试剂三：液体 | 2ml | 4℃ |
试剂四：液体 | 25ml | 4℃ |
试剂五：液体 | 6ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 |
试剂二：1000μg/ml蔗糖溶液10ml×1瓶，4℃保存；
试剂五：液体6ml×1瓶，4℃避光保存；
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
分光光度计预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。
样本测定(在EP管中加入下列试剂）：
试剂名称（μl） | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 10 | 10 |
|
|
蒸馏水 |
| 45 | 45 | 55 |
试剂二 |
|
| 10 |
|
试剂一 | 45 |
|
|
|
混匀，25℃准确水浴10min
沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却
试剂四 | 210 | 210 | 210 | 210 |
试剂五 | 60 | 60 | 60 | 60 |
混匀，沸水浴30min，冷却后，取200μl 至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。
SS-Ⅱ活性计算
1、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min/g鲜重) = C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷W
C标准管：标准管浓度，1000μg/ml；V1：加入反应体系中样本体积，0.01ml； V2：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。
关键字： 蔗糖合成酶（合成方向；SS-Ⅱ）检测试剂;
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