蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
测定原理：
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
组成：
产品名称 | SC007-50T/24S | Storage |
提取液：液体 | 60ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 4ml | -20℃ |
试剂二：1000μg/ml蔗糖溶液 | 10ml | 4℃ |
试剂三：液体 | 3ml | -20℃ |
试剂四：液体 | 40ml | 4℃ |
试剂五：液体 | 12ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 |
自备仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
样品测定的准备：
按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
试剂名称（μl） | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 30 | 30 |
|
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蒸馏水 |
| 150 | 150 | 180 |
试剂二 |
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| 30 |
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试剂一 | 150 |
|
|
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混匀，25℃准确水浴10min
沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却
试剂四 | 700 | 700 | 700 | 700 |
试剂五 | 200 | 200 | 200 | 200 |
混匀，沸水浴30min，冷却后， 480nm下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。
SPS活力单位的计算:
1、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=50×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg /min /g鲜重) = C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=50×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷W
C标准管：标准管浓度，1000μg/ml；V1：加入反应体系中样本体积，0.03ml； V2：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。
关键字： 蔗糖磷酸合成酶（SPS）检测试剂盒;
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