小鼠激活蛋白C(APC)ELISA试剂盒

产品用途：

用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中活化蛋白C(APC)的含量 。

重要提示：仅供科研实验使用，不得用于临床诊断。

保存条件与有效期：

保存条件：2-8℃冷藏保存 。

有效期：通常为6个月。

检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA) ：

预先用纯化的抗小鼠APC抗体（捕获抗体）包被微孔板。

加入待测样本或标准品，样本中的APC与包被抗体结合。

洗涤去除未结合物质。

加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗小鼠APC抗体（检测抗体），形成“固相捕获抗体-抗原(APC)-酶标检测抗体”复合物。

再次洗涤去除未结合的酶标抗体。

加入底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺），在HRP催化下显色（蓝→黄）。

加入终止液（通常是硫酸）终止反应。

在450nm波长下测量吸光度(OD值)。

样本中APC浓度与OD值成正比，通过标准曲线计算浓度 。

样本处理要求 (关键步骤)：

血清：全血标本室温放置约2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，取上清待测。避免反复冻融，可分装于-20℃或-80℃长期保存 。

血浆：使用适当的抗凝剂（如EDTA,肝素）收集全血，混匀后按血清处理方法离心取上清 。

组织匀浆/细胞上清：需常规处理后按说明离心取上清检测 。

检测范围：

典型检测范围：0.5 ng/mL - 12 ng/mL（96孔板） 。

实验注意事项 (关键技术点)：

表面效应：

固相载体（如聚苯乙烯酶标板）通过物理吸附包被蛋白抗原（如包被抗体）时，可能导致蛋白构象和抗原性发生改变 。

这种改变可能直接影响ELISA结果的准确性，造成假阴性或假阳性 。

抗体固相化后也可能因摊开、不均分布、构象变化而影响其活性 。

关键对策：

严格遵循试剂盒操作步骤，精确控制反应时间和温度。

确保彻底洗涤，避免非特异性结合。

使用精确的移液器和操作技巧。

设置合理的复孔、阴性对照、阳性对照和标准品，确保结果可靠性。

仔细阅读实际购买的试剂盒说明书，了解其特定的注意事项。

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