人角膜内皮细胞
产品信息
| 产品名称 | 人角膜内皮细胞 |
| 简称 | CECs |
| 组织来源 | 眼角膜组织 |
| 产品规格 | 5×10^5Cells/T25 |
| 细胞简介 | 人角膜内皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞（CEC）在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵”功能调节角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱，常导致角膜水肿而使角膜部分甚至完全失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有：①角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能；②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用；③角膜内皮细胞通过Na⁺-K⁺-ATP酶活性，维持角膜和房水内Na⁺梯度，防止水分渗入角膜内，维持角膜实质层相对脱水状态，维持透明性。 |
| 方法简介 | 钰博实验室分离的人角膜内皮细胞采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。 |
| 质量检测 | 钰博实验室分离的人角膜内皮细胞经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 |
| 培养信息 | 自备试剂：0.25%胰蛋白酶/ ;多聚-L-赖氨酸溶液(1×)/ 或多聚-L-赖氨酸溶液(10×)/ 或明胶包被液(1 mg/mL) / ;PBS/ ;完全培养基包被条件：PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）培养基：人角膜内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)换液频率：每2-3天换液一次生长特性：贴壁细胞形态：内皮细胞样传代比例：1:2传代特性：可传2-3代消化液：0.25%胰蛋白酶人角膜内皮细胞体外培养周期有限；建议使用钰博配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 |
原代细胞传代方法：
一、贴壁细胞的消化法传代
1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或与EDTA混合液）轻轻摇动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
二、悬浮细胞的传代
1、直接传代
1）让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3。
2）用吸管吹打形成细胞悬液后，分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。
2、离心法传代
1）将细胞连同培养液一并转移到离心管内，离心800-1000rpm，5分钟。
2）去除上清，加新的培养液一离心管内，用吸管吹打使之形成细胞悬液。
3）将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中，置37℃培养箱中培养。
原代细胞培养中的6个常见错误
错误＃1：一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间
纠正＃1：原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。
错误＃2：解冻小瓶后直接离心原代细胞
纠正＃2：我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。
错误＃3：允许原代细胞变得过于融合
纠正＃3：当生长至100％汇合时，原代细胞可以变得衰老。记住，原代细胞不是100％纯，因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95％融合时，对原代细胞进行传代培养。
错误＃4：传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化
纠正＃4：当细胞传代时，使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。我们特别推荐专门为原代细胞配制的胰蛋白酶中和溶液，但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑制剂。
错误＃5：原代细胞可以很容易地重新冻存
纠正＃5：通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。
错误6：原代细胞可以无限的增殖
纠正＃6：与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞（如成纤维细胞）可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。
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开发生产科研试剂和特色检验产品为方向，经过两年多的努力，已经建立了免疫学和分子生物学的五个技术平台，开发了ELISA/ELISpot酶联免疫试剂盒、重组蛋白、荧光标记抗体、四聚体(Tetramer)特异性T细胞检测试剂盒、Aimplex流式高通量多因子检测、microRNA表达谱分析和功能研究等系列产品和服务，与国内外免疫学、干细胞、传染病和肿瘤研究及临床检验领域的科学家们建立了良好的合作关系，形成了一定的品牌影响力。钰博生物另建有七大技术服务平台（ELISA定制服务，免疫学检测服务、分子生物学技术服务、蛋白表达与纯化技术服务、抗体制备技术服务、细胞培养技术服务、整体实验课题服务。用专业的知识、专业的设备、专业的态度为客户提供一站式实验技术服务！