核心构成:由两部分关键成分组成。
藻红蛋白(PE):一种从红藻或蓝藻中提取的天然荧光蛋白,具有极高的荧光量子产率和光稳定性,发射波长通常在 565-575nm,呈明亮的橙红色荧光,是生物检测中常用的荧光探针。
生物素(Biotin):维生素 B 族成员,能与亲和素、链霉亲和素(Streptavidin)形成极强的特异性非共价结合(亲和力常数约 10¹⁵ M⁻¹),且结合不可逆。
标记原理:通过化学交联反应,将生物素分子上的活性基团(如羧基、氨基)与藻红蛋白表面的氨基、羟基等官能团连接,形成稳定的共价键。常用交联剂如 N - 羟基琥珀酰亚胺酯(NHS),可在温和条件下高效偶联,且不显著破坏藻红蛋白的荧光活性和生物素的结合能力。
核心优势:
荧光性能优异:PE 的荧光强度远高于传统荧光染料(如 FITC),且抗光漂白能力强,适合长时间观察或高灵敏度检测。
通用性强:生物素 - 亲和素系统的高特异性,让 PE - 生物素可与多种亲和素修饰的试剂搭配,无需针对不同靶标重新设计荧光探针,降低实验成本。
注意事项:
储存条件:需在 - 20℃避光、密封保存,避免反复冻融,否则会导致藻红蛋白聚集,荧光活性下降。
非特异性结合:使用前需优化浓度,避免因生物素过量或探针浓度过高,导致与样本中杂质的非特异性结合,干扰检测结果。
兼容性:需确认实验体系(如 pH 值、离子强度)是否适配,极端条件可能破坏 PE 的荧光结构或生物素的结合能力。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体!
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