总一氧化氮合成酶(NOS)分型测定试剂盒/比色法/48样
测定意义:
NOS 催化 L-Arg 和分子氧反应生成 NO ,NO 与亲核性物质生成有色化合物,在 530nm 波长下测定吸光度,根据吸光度的大小可计算出 NOS 活力。
测定原理:
NOS 主要有两种类型:即结构型(cNOS)和诱导型(iNOS) 。结构型(cNOS)主要存在于神经元和内皮细胞内,依赖钙;诱导型(iNOS)主要存在于巨噬细胞内,不依赖钙。根据此原理可以分型。
操作表:
TNOS 空白管
TNOS 测定管
iNOS 空白管
iNOS 测定管
双蒸水(μl)
a*+100
100
a*
样本(μl)
试剂六 (μl)
摇动一下试管架
试剂一 (μl)
200
试剂二(μl)
10
试剂三(μl)
混匀,37ºC 水浴准确反应 15 分钟
试剂四(μl)
试剂五(μl)
2000
混匀,530nm 处,1cm 光径,蒸馏水调零,测各管的吸光度值。
注 意:
1 、促进剂最好现用现配,配好后尽量一日内用完,如有剩余则-20ºC 以下保存不超过一周;未配制之前的试剂二促进剂和稀释液均应-20ºC 以下保存,如淡黄色或白色粉末变成咖啡色或黄褐色颗粒则失效不可用。
2、试剂六为过饱和溶液,一次实验用不完再用时可能有结晶,用之前可以再次边沸水浴边用玻璃棒搅拌使其溶解。
3 、NOS 活性低,稳定性差,样品或匀浆上清如不马上检测,应置-20ºC 以下冷冻保存。
4、试剂一与配制好的试剂二应尽量避免反复冻融。
5、室温低时,NOS 试剂五会出现浑浊,如果已经在测试管中加入了 NOS 试剂五,可将测试管对着灯光,观察有无结晶或浑浊。如果有结晶或浑浊,请将每只测试管放到 37ºC 水浴锅中晃动 5 分钟,再比色。
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