环磷酸腺苷(cAMP)含量测定试剂盒/48样

环磷酸腺苷(cAMP)含量测定试剂盒/48样

测定意义：

环磷酸腺苷（Adenosine 3’ ，5’-cyclic monophosphate ，cAMP）是一种重要的具有生物活性的环核苷酸类物质，广泛存在于生物体内。cAMP 作为生命信息传递的“第二信使 ”，不仅参与机体多种酶的代谢过程，对细胞的分裂、分化和发育起着重要的调节作用，而且还可调节基因转录和翻译，影响蛋白质合成。

测定原理：

cAMP 在 254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。

自备仪器和用品：

高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、氮吹仪、涡旋振荡器、针头式过滤器（水系，50 个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各 1 个，0.45    μm）、C18 柱（耐水，4.6    ×250 mm）、可调式移液器、样品瓶（50 个，2  mL）、内衬管（50 个，放置在样品瓶内用于微量样品进样）、甲醇（色谱级，200 mL）和超纯水。

cAMP 含量测定操作步骤：

1.   开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设置进样量 10   μL，流速 0.8 mL/min，柱温 30  ℃,测试时间 45 min，检测波长 254 nm，设置完毕保存方法组。

2.  用流动相过柱子，待基线稳定后开始加样。

3.  加入标准品 10 μL，在 45 min 内可分离 cAMP ，cAMP 的保留时间在 35 min 左右（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的 cAMP 标准品的峰面积。

4.  加入样品 10 μL，在相应保留时间处检测 cAMP 的峰面积。

注 意：

1 、 本试剂盒检测限为 1 ug/mL，若 cAMP 含量低于该浓度需要对样品浓缩，或选择 cAMP含量 ELISA 试剂盒进行测定。

2 、 为了避免使用过程中柱压过大，流速由小到大调节。

3 、 使用完毕时，先以 20%甲醇水溶液冲洗色谱柱 1 h，再用纯甲醇洗色谱柱 30 min。

4 、 标准品的稀释倍数要根据样品中 cAMP 浓度确定，样品中 cAMP 的峰面积必须落在不同浓度的 cAMP 标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。