环磷酸鸟苷(cGMP)含量测定试剂盒/48 样
测定意义:
环磷酸鸟苷(Guanosine 3’ ,5’-cyclic monophosphate ,cGMP)是一种重要的具有生物活性的环核苷酸类物质,广泛存在于生物体内。cGMP 作为生命信息传递的“第二信使”,不仅参与机体多种酶的代谢过程,对细胞的分裂、分化和发育起着重要的调节作用,而且还可调节基因转录和翻译,影响蛋白质合成。
测定原理:
cGMP 在 254 nm 下有吸收峰,可以利用高效液相色谱法测定其含量。
自备仪器和用品:
高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、氮吹仪、涡旋振荡器、针头式过滤器(水系,50 个,0.22μm)、滤膜(水系和有机系各 1 个,0.45 μm)、C18 柱(耐水,4.6 ×250 mm)、可调式移液器、样品瓶(50 个,2 mL)、内衬管(50 个,放置在样品瓶内用于微量样品进样)、甲醇(色谱级,200 mL)和超纯水。
cGMP 含量测定操作步骤:
1. 开启电脑、检测器和泵,安装上色谱柱,打开软件,在方法组中设置进样量 10 μL,流速 0.8 mL/min,柱温 30 ℃,测试时间 45 min,检测波长 254 nm,设置完毕保存方法组。
2. 用流动相过柱子,待基线稳定后开始加样。
3. 加入标准品 10 μL,在 45 min 内可分离 cGMP ,cGMP 的保留时间在 10 min 左右(柱子不同,保留时间有差异),计算不同浓度的 cGMP 标准品的峰面积。
4. 加入样品 10 μL,在相应保留时间处检测 cGMP 的峰面积。
注 意:
1 、本试剂盒检测限为 1 ug/mL,若 cGMP 含量低于该浓度需要对样品浓缩,或选择 cGMP含量 ELISA 试剂盒进行测定。
2 、为了避免使用过程中柱压过大,流速由小到大调节。
3 、使用完毕时,先以 20%甲醇水溶液冲洗色谱柱 1 h,再用纯甲醇洗色谱柱 30 min。
4 、标准品的稀释倍数要根据样品中 cGMP 浓度确定,样品中 cGMP 的峰面积必须落在不同浓度的 cGMP 标准品的峰面积之内,该标准品稀释倍数只是一个参考。
关键字: cGMP试剂盒 ; cGMP ELISA KIT ; cGMP ELISA试剂盒 ;
上海酶联生物科技有限公司,成立之初,获得国内外酶联免疫同行的大力支持,公司为了感恩于同行无私的帮助,特取意酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA试剂盒)的“酶联”两字,时刻铭记回报社会,公司已制定十年内,将公司打造成国内酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)行业超级航母,并且,这么多年,我们一直是为了这个愿景,坚定不移的努力奋斗着。