OVA-FITC:绿色荧光素标记卵清白蛋白
OVA-FITC即绿色荧光素标记卵清白蛋白,是通过化学偶联技术将荧光素(FITC)与卵清白蛋白(OVA)共价结合形成的荧光探针。卵清白蛋白作为一种来源广泛、纯度易控、生物相容性优良的球状蛋白质,不仅具有稳定的空间构象,还含多个可修饰的氨基位点,是生物医学研究中常用的载体蛋白;而荧光素(FITC)作为经典的绿色荧光染料,其激发波长约为490-495nm,发射波长约为515-520nm,荧光颜色呈明亮的黄绿色,具有荧光量子产率高、光学性能稳定等特点,在荧光检测领域应用已逾数十年。
该标记物的制备核心是在保留OVA生物活性的前提下,实现FITC与OVA的高效稳定偶联,常用方法为碳二亚胺法或琥珀酰亚胺酯法。碳二亚胺法通过活化FITC的羧基,使其与OVA分子上的游离氨基形成酰胺键;琥珀酰亚胺酯法则先将FITC转化为活性更高的琥珀酰亚胺酯衍生物,再与OVA的氨基发生特异性偶联。两种方法均需严格控制反应条件:pH值需维持在7.0-7.5之间,此环境既能保证偶联效率,又可避免OVA变性;反应温度控制在4℃-室温,减少荧光素淬灭;同时精准调节FITC与OVA的摩尔比,确保标记率处于2-6个FITC分子/个OVA分子的理想范围——标记率过高易导致OVA空间构象改变,降低生物结合能力;标记率过低则荧光信号强度不足,影响检测灵敏度。反应完成后,需通过凝胶过滤层析(如Sephadex G-25)纯化,去除未结合的游离FITC,获得高纯度的OVA-FITC产物。
OVA-FITC凭借优良的荧光特性和生物相容性,在免疫检测、细胞生物学研究等领域应用广泛。在免疫荧光分析中,它常作为荧光二抗的载体,与特异性一抗结合后,通过荧光显微镜或流式细胞仪实现对目标抗原的精准定位和定量检测,例如在肿瘤标志物检测中,可清晰识别癌细胞表面抗原的表达分布;在细胞成像领域,OVA-FITC可用于细胞通透性、胞内转运机制的追踪研究,借助其明亮的绿色荧光,直观观察物质进入细胞后的动态分布过程;此外,在疫苗研发和药物递送研究中,它可作为抗原或药物载体的示踪剂,实时监测疫苗或药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄规律,为剂型优化提供关键数据支持。
使用OVA-FITC时需注意以下事项:一是储存条件,需置于-20℃避光密封保存,建议分装储存以避免反复冻融,防止荧光淬灭和蛋白变性;二是使用环境,检测过程中需避免强光直射和高温,可添加适量抗淬灭剂(如甘油、DABCO)延长荧光信号持续时间;三是浓度控制,需根据实验需求精准调节使用浓度,过高浓度易引发非特异性结合,干扰实验结果准确性;四是实验体系优化,建议在中性缓冲环境中使用,避免强酸强碱破坏蛋白结构和荧光性能。
用途:科研
包装:瓶装
产地:西安瑞禧生物科技有限公司

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