Streptavidin-TRITC:罗丹明标记链霉亲和素
Streptavidin-TRITC是四甲基罗丹明(TRITC)标记的链霉亲和素,是通过共价偶联将TRITC与链霉亲和素结合形成的红色荧光功能蛋白。链霉亲和素作为生物素-亲和素系统的核心组件,具有对生物素*高的亲和力、低免疫原性和良好的生物相容性;TRITC作为常用红色荧光染料,激发波长约540-550nm,发射波长约570-580nm,荧光颜色鲜艳的橙红色,光稳定性强、抗淬灭能力优良,两者结合后形成的Streptavidin-TRITC,兼具特异性亲和结合功能和稳定的红色荧光示踪能力,尤其适用于多色荧光成像实验。
其制备常采用异硫氰酸酯法,该方法反应特异性强、偶联效率高。TRITC分子中的异硫氰酸酯基团可与链霉亲和素分子上的游离氨基(主要为赖氨酸残基氨基)发生特异性反应,形成稳定的硫脲键,实现共价结合。反应过程需严格控制条件:反应体系pH值维持在8.0-9.0,此环境可促进异硫氰酸酯基团与氨基的反应,同时减少链霉亲和素变性;反应温度控制在4℃,降低TRITC荧光淬灭风险和蛋白活性损失;精准调节TRITC与链霉亲和素的摩尔比(通常为2-5:1),确保标记率适中。反应完成后,通过凝胶过滤层析(如Sephadex G-25)纯化,去除未结合的游离TRITC,获得高纯度的Streptavidin-TRITC产物,保证其生物活性和荧光性能。
Streptavidin-TRITC的核心应用集中在多色荧光成像、免疫检测和生物分子示踪领域。在多色荧光成像实验中,由于其发射波长与FITC等绿色荧光染料差异显著,可与其他荧光标记试剂搭配使用,实现多靶点的同时检测,如细胞内多种蛋白的共定位分析、组织切片中不同抗原的分布观察;在免疫检测领域,可作为信号放大试剂与生物素化一抗结合,通过红色荧光实现目标抗原的定位和定量检测,适用于免疫组织化学、免疫印迹等实验;在生物分子示踪领域,可与生物素化的核酸、多肽等结合,追踪其在细胞内的转运、定位过程,为分子生物学机制研究提供直观数据;此外,还可用于流式细胞术对特异性细胞群体的分选和检测,提高检测的灵敏度和准确性。
使用Streptavidin-TRITC时需关注以下要点:一是储存条件,需避光、密封置于-20℃低温环境保存,避免与氧化剂接触,防止荧光染料氧化失效,建议分装储存避免反复冻融;二是检测参数调节,实验需使用匹配的荧光检测设备,调整激发光(540-550nm)和发射光(570-580nm)波长,确保高效捕捉荧光信号;三是多色成像优化,需合理选择搭配的荧光染料,避免发射波长重叠导致信号干扰;四是活性验证,使用前通过与生物素化蛋白的结合实验验证其亲和活性;五是纯度验证,使用前通过凝胶电泳或HPLC验证产物纯度,确保无游离TRITC污染;六是荧光保护,体外实验可添加红色荧光抗淬灭剂,延长荧光信号寿命。
用途:科研
包装:瓶装
产地:西安瑞禧生物科技有限公司

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