实验原理
基于荧光定量PCR技术，通过特异性引物和染料探针靶向扩增变异变形杆菌（Proteus mirabilis）的保守基因序列，结合标准曲线实现定量检测，或通过Ct值判定定性结果。
产品名称 | 变异变形杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Proteus mirabilis Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3328 |
操作步骤
样本处理区
样本前处理：按常规方法采集临床或环境样本（如分泌物、组织等）。
DNA提取：使用配套或自备试剂提取样本DNA，建议使用柱式提取法。
试剂准备区
试剂盒组分（预混液、引物探针、阳性对照等）需自然融化后混匀，短暂离心。
按比例配制反应体系，避光操作。
加样与扩增
将待测DNA模板、阴性/阳性对照分别加入反应管，避免气泡。
按以下程序运行PCR扩增：
预变性：95℃ 5分钟
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）
结果分析
定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。
定性检测：直接比较样本Ct值与阈值判定阴阳性。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、PCR扩增需严格分区，避免交叉污染。
质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板）和阳性对照。
防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及仪器。
数据判读：若Ct值≥35或无扩增曲线，视为阴性；强阳性样本建议稀释后复测。
性能参数
灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶标DNA。
特异性：引物经优化，不与常见共生菌或病原体交叉反应。
应用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
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