小鼠脂联素(ADP)elisa试剂盒

                                             小鼠脂联素(ADP)elisa试剂盒
概述

脂联素（Adiponectin, ADP）**是由脂肪细胞分泌的激素（分子量30kDa），以三聚体（LMW）、六聚体（MMW）和高分子量（HMW）多聚体形式存在，通过激活AMPK和PPAR-α通路调控糖脂代谢。作为胰岛素增敏剂，其检测对肥胖、糖尿病和代谢综合征研究具有核心价值。

检测原理

双抗体夹心ELISA（多聚体特异性）：

捕获抗体：预包被抗小鼠ADP单抗（克隆19F1）识别保守结构域

检测抗体：生物素化抗小鼠ADP单抗（克隆23A5）结合多聚体

信号放大：链霉亲和素-HRP催化超敏TMB显色

检测：OD450nm值与总ADP浓度正相关（检测范围：0.2-50 μg/mL）

试剂盒组成

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T（可拆）  2-8℃  高载量包被

ADP标准品  0.2-50 μg/mL  -20℃  重组小鼠ADP（含HMW形式）

生物素化抗体  100 μL  -20℃（避光）  无载体蛋白

SA-HRP  100 μL  2-8℃  RZ>3.0

脂肪裂解液  10 mL  -20℃  含蛋白酶抑制剂

多聚体稳定剂  5 mL  -20℃  防止解聚

样本要求

适用样本：

血清（空腹采血最佳）

血浆（EDTA抗凝）

脂肪组织匀浆（1:9 PBS匀浆）

细胞培养上清（3T3-L1脂肪细胞）

特殊处理：

肥胖模型血清需1:5预稀释

避免反复冻融（HMW形式易降解）

稳定性：

4℃保存≤72h（需加稳定剂）

-80℃可保存6个月（分装冻存）

实验流程优化

标准曲线建立：

冻干标准品用1mL去离子水复溶

7点梯度稀释（0.2、1、2、5、10、25、50 μg/mL）

关键步骤：

加样体积：50μL样本+50μL稀释液

一抗孵育：37℃ 90min（湿度>60%）

显色控制：室温精确10min

质控要求：

空白OD值<0.1

正常小鼠血清质控（5-15 μg/mL）

ob/ob小鼠阳性对照（<3 μg/mL）

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