人二磷酸腺苷(ADP)ELISA试剂盒

本试剂盒基于经典酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法原理，预先将人二磷酸腺苷(ADP)特异性抗体包被于固相微孔板，待测样本中的ADP可与固相抗体特异性结合，再结合酶标记检测抗体形成固相抗体-ADP-酶标抗体免疫复合物，经洗涤去除未结合杂质后，加入底物液发生酶促显色反应，显色深浅与样本中ADP含量呈正相关，通过检测吸光度值即可精准定量样本中人ADP的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人二磷酸腺苷(ADP)ELISA试剂盒

英文名称：ADP ELISA Kit
货号：Y-E2689

规格：48T/96T

灵敏度：最低可检出 1.25nmol/L ADP 样本

检测范围：2.5nmol/L - 80nmol/L

反应时间：样本孵育 60min，酶结合物孵育 30min，底物显色 15min

显色系统：TMB 单组份显色液，硫酸终止液终止反应

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

特异性：仅特异性结合人 ADP，与 ATP、AMP、GTP 交叉反应率＜3.5%

重复性：板内 CV≤7.2%，板间 CV≤9.1%

注意事项：样本需低温离心去除血小板杂质，避免 ADP 体外释放干扰检测；终止后 15min 内完成酶标仪读数
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

取出试剂盒所有组分，室温平衡 30min，配制洗涤液、ADP 标准品梯度稀释液、样本稀释液，标记酶标板孔位区分空白、标准品、待测样本。

每孔先加入对应稀释后的标准品溶液、待测样本、空白稀释液各 50μL，随即立即加入一步法酶结合工作液 100μL，封板膜密封酶标板。

恒温孵育箱 37℃避光孵育 60min，全程避免酶标板晃动、液体溅出孔外。

小心撕去封板膜，弃去板内全部液体，每孔加满洗涤洗涤液，浸泡 30s 后拍干，重复洗板操作共计 5 次。

所有孔依次加入显色底物 A 液 50μL、显色底物 B 液 50μL，轻柔震荡酶标板混匀，37℃避光显色 15min。

每孔精准加入终止液 50μL，快速轻晃酶标板终止显色反应，孔内液体由蓝色转为黄色。

酶标仪设置 450nm 主波长、630nm 参比波长，15min 内读取各孔 OD 吸光度值，根据标准品曲线计算样本 ADP 浓度。
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