大鼠分化簇86(CD86/B7-2)elisa试剂盒
一、检测原理与技术特性
双抗体夹心ELISA技术
捕获抗体：微孔板预包被抗大鼠CD86单抗（如小鼠IgG1），靶向CD86的胞外域（IgV样结构域），检测范围0.5–50 ng/mL。
信号放大：生物素-链霉亲和素-HRP三级放大系统，搭配超敏化学发光底物（灵敏度0.2 ng/mL）。
抗干扰设计：含CD80（B7-1）阻断肽（交叉反应率＜0.5%），确保检测特异性。
动态范围优化
覆盖基础表达（静息状态大鼠脾细胞＜1 ng/mL）至激活状态（LPS刺激后＞20 ng/mL）。
二、核心组分与样本要求
组分 技术参数
预包被96孔板 抗CD86抗体固定化（批间差＜7%），可拆分使用
标准品 重组大鼠CD86（0、0.5、2、10、25、50 ng/mL，含0.1% BSA冻干保护剂）
适用样本 血清、脾细胞/树突细胞培养上清、淋巴结匀浆（需含1% NP-40裂解）
特殊添加剂 含0.01% ?防腐剂，2–8℃保存有效期18个月
三、应用场景与科研价值
免疫激活研究
T细胞共刺激：CD86与CD28结合后IL-2分泌水平检测（联合ELISPOT验证）。
自身免疫病：实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型淋巴结CD86表达上调。
肿瘤免疫治疗
PD-1/CTLA-4抑制剂疗效评估（CD86水平反映抗原提呈细胞活化状态）。
感染免疫
细菌脂多糖（LPS）刺激后，巨噬细胞CD86表达动力学分析。
四、操作规范与质控要点
样本处理
细胞培养上清需离心（300×g，5分钟）去除细胞碎片，-80℃保存避免反复冻融。
避免使用EDTA抗凝血浆（可能螯合二价离子影响蛋白构象）。
实验关键
温育条件：37℃避光45分钟，洗涤液需含0.1% Tween-20（pH 7.2–7.6）。
质控标准
每板需含：标准曲线（R2≥0.98）、高/低值质控（CV＜10%）。
五、性能比较与注意事项
特性 优势 局限性
灵敏度 可检测膜结合型及可溶性CD86 无法区分CD86不同糖基化修饰亚型
特异性 与CD80交叉反应＜0.5% 高浓度样本需稀释验证（＞50 ng/mL）
通量 适配自动化平台 组织样本需优化裂解缓冲液
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