大鼠白介素31(IL-31)elisa试剂盒

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1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠IL-31四螺旋束结构域。预包被抗大鼠IL-31单抗（克隆号：MAB19341）捕获样本中的IL-31，生物素标记的检测抗体（BAF1934）与链霉亲和素-HRP系统放大信号，TMB显色强度与IL-31浓度呈正相关。

2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高结合力（Kd=0.2nM）

重组标准品  0-1000pg/mL  -20℃  冻干粉，含His标签

生物素-抗体  100μL  -20℃（避光）  识别C端表位

皮肤裂解缓冲液  15mL  -20℃  含1% Triton X-100

瘙痒模型阳性对照  0.5mL  -80℃  重组IL-31诱导样本

 3. 性能参数

检测范围：15.6-1000pg/mL（可扩展至5000pg/mL）

灵敏度：5.8pg/mL（基于2SD空白值）

样本兼容性：

最佳：皮肤组织匀浆（背侧真皮层）

适用：血清（需1:4稀释）、DRG神经节匀浆

交叉反应：

大鼠IL-31：100%

小鼠IL-31：82%

人IL-31：<0.1%

精密度：

批内CV：4.7-6.3%

批间CV：7.1-9.5%

4. 样本处理方案

4.1 皮肤组织处理

取50mg真皮组织

加入450μL预冷裂解缓冲液

组织研磨仪匀浆（4℃，30Hz，2×30秒）

12000×g离心20分钟（4℃）

4.2 血清采集

使用SST管采集

室温凝固30分钟后离心（2000×g，15分钟）

分装冻存前去除纤维蛋白

4.3 保存稳定性

皮肤匀浆：-80℃保存3个月（回收率>90%）

血清样本：避免反复冻融（≤2次）

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000pg/mL

复溶液：含0.1% BSA的PBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃摇床（300rpm）

洗板液：含0.05% Tween-20的PBS

显色终止：2M H2SO4（50μL/孔）

质控要求

空白OD值：<0.12

最低标准点OD值：≥0.35

回收率标准：85-115%

6. 主要应用方向

瘙痒机制研究：IL-31/TRPV1信号通路

特应性皮炎模型：MC903诱导的皮肤炎症

神经免疫交互：背根神经节IL-31Rα表达

生物药评估：IL-31单抗药效分析

7. 注意事项

样本干扰

皮肤样本需去除皮下脂肪

高IgE血清需预处理（Protein G柱）

标准曲线拟合

推荐使用四参数逻辑曲线

要求R2≥0.990

异常处理

超出检测范围样本：建议系列稀释

溶血样本：需超速离心（10000×g，10分钟）

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