是一种趋化因子,主要通过与受体 CCR6 结合,招募树突细胞、T细胞(特别是Th17细胞)、B细胞等,参与炎症反应、黏膜免疫、自身免疫病及肿瘤微环境调控。
本试剂盒采用 双抗体夹心ELISA法,可高灵敏度、高特异性地定量检测人血清、血浆、细胞培养上清等样本中的 MIP-3α/CCL20 水平,适用于免疫学、肿瘤学及感染性疾病研究。
产品名称 | 人MIP-3α/CCL20elisa试剂盒 | 货号 | XG-H1684 |
英文名称 | Human MIP-3α/CCL20 ELISA Kit | 规格 | 48T\96T |
1. 试剂盒基本信息
检测目标:人MIP-3α/CCL20蛋白
检测方法:双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验)
检测范围:通常 15.6–1000 pg/mL(不同品牌可能略有差异)
灵敏度:通常 <5 pg/mL(最低检测限)
样本类型:血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞培养上清、组织匀浆、唾液、支气管肺泡灌洗液(BALF)等
检测时间:约 3–4小时(具体取决于操作流程)
2. 试剂盒组成
组分 说明
预包被微孔板 96孔板(抗人CCL20抗体预包被)
标准品(重组人CCL20) 冻干粉或液体,浓度梯度(如0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL)
检测抗体(生物素标记) 生物素化抗人CCL20抗体
酶结合物(SA-HRP) 链霉亲和素-辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)
TMB显色液 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(HRP底物)
终止液 1M或2M硫酸(H?SO?)
洗涤缓冲液(10×或20×) PBS-Tween或其他缓冲液
样本稀释液 用于稀释高浓度样本
封板膜 防止蒸发和污染
3. 检测原理
捕获抗体结合:样本中的CCL20与预包被在微孔板上的抗体结合。
检测抗体结合:加入生物素标记的二抗,形成“抗体-CCL20-生物素抗体”复合物。
酶结合物反应:加入链霉亲和素-HRP(SA-HRP),与生物素结合。
显色反应:加入TMB底物,HRP催化显蓝色。
终止反应:加入终止液(H?SO?),颜色由蓝变黄。
检测吸光度:在450 nm(主波长)和570/630 nm(参考波长)下测定OD值。
计算浓度:根据标准曲线计算样本中CCL20浓度。
4. 操作步骤(简要)
标准品和样本准备:复溶标准品,稀释样本(如需要)。
加样:每孔加入100 μL标准品或样本,37℃孵育1–2小时。
洗涤:洗板3–5次,去除未结合物。
加检测抗体:加入生物素化抗体,37℃孵育1小时。
加酶结合物:加入SA-HRP,37℃孵育30分钟。
显色:加入TMB,避光反应10–30分钟。
终止:加入终止液,立即读数。
5. 应用领域
炎症性疾病:类风湿关节炎(RA)、炎症性肠病(IBD)、银屑病等。
感染免疫:HIV、HPV、COVID-19等病毒感染中CCL20的调控作用。
肿瘤研究:CCL20在结直肠癌、肝癌等肿瘤微环境中招募免疫细胞。
黏膜免疫:呼吸道、肠道黏膜中CCL20参与抗菌防御。
自身免疫病:多发性硬化(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)等。
6. 注意事项
样本处理:
血清/血浆:离心去除颗粒物,避免反复冻融。
细胞培养上清:离心去除细胞碎片,-80℃长期保存。
标准曲线:每次实验需新鲜配制,确保线性(R2≥0.99)。
干扰因素:高浓度样本需适当稀释,避免溶血或脂血影响。
重复性:建议每样本做复孔,减少误差。
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