产品介绍：
是一种趋化因子，主要通过与受体 CCR6 结合，招募树突细胞、T细胞（特别是Th17细胞）、B细胞等，参与炎症反应、黏膜免疫、自身免疫病及肿瘤微环境调控。
本试剂盒采用 双抗体夹心ELISA法，可高灵敏度、高特异性地定量检测人血清、血浆、细胞培养上清等样本中的 MIP-3α/CCL20 水平，适用于免疫学、肿瘤学及感染性疾病研究。
产品名称 | 人MIP-3α/CCL20elisa试剂盒 | 英文名称 | Human MIP-3α/CCL20 ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A129742 |
1. 试剂盒基本信息
检测目标：人MIP-3α/CCL20蛋白
检测方法：双抗体夹心ELISA（酶联免疫吸附试验）
检测范围：通常 15.6–1000 pg/mL（不同品牌可能略有差异）
灵敏度：通常 <5 pg/mL（最低检测限）
样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆、唾液、支气管肺泡灌洗液（BALF）等
检测时间：约 3–4小时（具体取决于操作流程）
2. 试剂盒组成
组分 说明
预包被微孔板 96孔板（抗人CCL20抗体预包被）
标准品（重组人CCL20） 冻干粉或液体，浓度梯度（如0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）
检测抗体（生物素标记） 生物素化抗人CCL20抗体
酶结合物（SA-HRP） 链霉亲和素-辣根过氧化物酶（Streptavidin-HRP）
TMB显色液 3,3',5,5'-四甲基联苯胺（HRP底物）
终止液 1M或2M硫酸（H?SO?）
洗涤缓冲液（10×或20×） PBS-Tween或其他缓冲液
样本稀释液 用于稀释高浓度样本
封板膜 防止蒸发和污染
3. 检测原理
捕获抗体结合：样本中的CCL20与预包被在微孔板上的抗体结合。
检测抗体结合：加入生物素标记的二抗，形成“抗体-CCL20-生物素抗体”复合物。
酶结合物反应：加入链霉亲和素-HRP（SA-HRP），与生物素结合。
显色反应：加入TMB底物，HRP催化显蓝色。
终止反应：加入终止液（H?SO?），颜色由蓝变黄。
检测吸光度：在450 nm（主波长）和570/630 nm（参考波长）下测定OD值。
计算浓度：根据标准曲线计算样本中CCL20浓度。
4. 操作步骤（简要）
标准品和样本准备：复溶标准品，稀释样本（如需要）。
加样：每孔加入100 μL标准品或样本，37℃孵育1–2小时。
洗涤：洗板3–5次，去除未结合物。
加检测抗体：加入生物素化抗体，37℃孵育1小时。
加酶结合物：加入SA-HRP，37℃孵育30分钟。
显色：加入TMB，避光反应10–30分钟。
终止：加入终止液，立即读数。
5. 应用领域
炎症性疾病：类风湿关节炎（RA）、炎症性肠病（IBD）、银屑病等。
感染免疫：HIV、HPV、COVID-19等病毒感染中CCL20的调控作用。
肿瘤研究：CCL20在结直肠癌、肝癌等肿瘤微环境中招募免疫细胞。
黏膜免疫：呼吸道、肠道黏膜中CCL20参与抗菌防御。
自身免疫病：多发性硬化（MS）、系统性红斑狼疮（SLE）等。
6. 注意事项
样本处理：
血清/血浆：离心去除颗粒物，避免反复冻融。
细胞培养上清：离心去除细胞碎片，-80℃长期保存。
标准曲线：每次实验需新鲜配制，确保线性（R2≥0.99）。
干扰因素：高浓度样本需适当稀释，避免溶血或脂血影响。
重复性：建议每样本做复孔，减少误差。
试剂与样本准备阶段
温度平衡（最容易被忽视的点）
操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。
后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。
样本处理
避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。
离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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ELISA试剂盒的主要优点缺点
维度 优势 (Pros) 劣势 (Cons)
检测性能 灵敏度极高，特异性强，结果准确 可能存在交叉反应，易受干扰物影响
操作体验 流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测 步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求
经济成本 适合大批量样本检测，长期看性价比尚可 单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异
应用范围 可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本 对样本质量（如是否溶血）敏感
关键字： 人;MIP-3α/CCL20;ELISA试剂盒;
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