兔C反应蛋白(CRP) ELISA试剂盒用于定量检测兔血清、血浆等样本中的C反应蛋白浓度,主要用于炎症和感染性疾病的诊断与监测。以下是其详细介绍:
1. 检测原理
采用双抗体夹心法ELISA技术。微孔板包被抗兔CRP抗体,加入样本后,样本中的CRP与固相抗体结合,再加入酶标记的抗CRP抗体,形成“抗体-CRP-酶标抗体”复合物。加入底物溶液(如TMB)显色,颜色深浅与样本中CRP浓度呈正相关。
2. 主要组成
预包被抗兔CRP抗体的微孔板
酶标记抗CRP抗体
CRP标准品(不同浓度梯度)
底物溶液(如TMB)
终止液(如硫酸溶液)
洗涤缓冲液
封板膜等。
3. 检测步骤
加样:向微孔中加入标准品和样本,每孔100μL,37℃孵育1小时。
洗涤:弃去液体,用洗涤缓冲液洗涤5次,拍干。
加酶标抗体:每孔加入100μL酶标抗体,37℃孵育1小时。
洗涤:同上一步骤。
显色:每孔加入50μL底物溶液,避光反应10-15分钟。
终止:每孔加入50μL终止液,终止反应。
读数:用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值。
结果分析
根据标准品绘制标准曲线,通过样本的OD值在标准曲线上查得对应的CRP浓度。
注意事项
试剂盒需在2-8℃保存,使用前平衡至室温。
洗涤步骤要彻底,避免残留液体影响结果。
显色反应需避光进行,终止液加入后应及时测定。
样本和试剂需准确加样,避免气泡和溅出。
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