多胺氧化酶（Polyamine oxidase，PAO）试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
多胺氧化酶是催化生物体内多胺氧化的关键酶，通过调节体内多胺水平和生成物的浓度，参与各种植物体对逆境胁迫的反应和生长发育过程。
测定原理：
PAO催化多胺氧化产生过氧化氢，在过氧化氢酶存在的条件下与底物显色，在550nm下有特征吸收峰，通过测定吸光值增加速率来反映PAO活性。
组成：
产品名称 | AO030-50T/48S | Storage |
试剂一：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂二：液体 | 6ml | 4℃ |
试剂三：液体 | 3ml | 4℃ |
试剂四：液体 | 3ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
自备仪器和用品：
分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
血清等液体：直接测定。
测定步骤：
分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
样本测定
试剂名称（µl） | 测定管 |
试剂一 | 700 |
试剂二 | 100 |
试剂三 | 50 |
样本 | 100 |
试剂四 | 50 |
迅速混匀，于550nm下测定初始吸光值A1与30min后吸光值A2。ΔA=A2-A1。 |
PAO活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白在每ml反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO（U/mg prot）＝ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.002÷T =166.67×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织在每ml反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO（U/g 鲜重）＝ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞在每ml反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO（U/104 cell）＝ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.002÷T =0.333×ΔA
按液体体积计算
单位的定义：每ml液体样本在每ml反应体系中每分钟A550变化0.002为一个酶活力单位。
PAO（U/ml）=ΔA×V反总÷V样÷0.002÷T =166.67×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；V样：加入样本体积，0.1 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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