草鱼出血病II型病毒（GCRV II）RNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
试剂简介：
一、试剂盒核心信息
检测目标与流行病学特征
草鱼出血病II型病毒（Grass Carp Reovirus II, GCRV II）
分类学地位：呼肠孤病毒科（Reoviridae），水生呼肠孤病毒属（Aquareovirus）
基因特征：
靶向VP6基因（编码主要结构蛋白，基因型特异性保守区）
辅助靶标S10基因（用于区分GCRV I/II/III亚型）
产品名称 | 草鱼出血病II型病毒（GCRV II）RNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法） | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1554 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
流行特点：
主要危害1龄以下草鱼苗种，水温25-30℃时暴发
典型症状：肌肉出血、鳃盖充血、肠壁透明化
技术原理
双重荧光PCR：
FAM通道：GCRV II特异性VP6基因探针
HEX通道：通用型S10基因探针（内参）
灵敏度：5拷贝/μL（优于传统RT-PCR 100倍）
二、试剂盒组成与样本处理
核心组分（25测试/盒）
组分 技术参数
核酸提取试剂 含鱼类组织专用裂解缓冲液（可有效破除鱼体粘多糖抑制）
RT-PCR预混液 含HotStart Taq酶+MMLV逆转录酶，支持一步法RT-PCR
引物探针组 VP6-FAM(5'-3')：CGT GAC ATC CTG TTC AAG/HEX-S10探针
质控系统 阳性对照（GCRV II-HN20株RNA）、阴性对照（DEPC水）、内标（斑马鱼β-actin）
样本采集规范
最佳样本类型：
病鱼：肝胰脏（病毒载量最高）、脾脏、肾脏
环境样本：养殖水体（需0.45μm滤膜浓缩100mL）
保存与运输：
立即检测：4℃保存≤24小时
长期保存：-80℃（避免反复冻融＞3次）
运输：干冰或RNA稳定剂（如RNAlater）
三、标准化检测流程
操作步骤（全程约2.5小时）
核酸提取
组织样本：取50mg加1mL裂解液，匀浆后70℃孵育10分钟
水体样本：离心浓缩后磁珠法提取（回收率＞85%）
RT-PCR反应
反应体系（20μL）：
预混液10μL + 引物探针2μL + 模板3μL + DEPC水5μL
扩增程序：
50℃ 15min（逆转录）→ 95℃ 3min → 45×[95℃ 10sec → 60℃ 45sec]（双通道采集）
结果判读标准
检测指标 Ct值范围
GCRV II(FAM) ≤35
35-38 可疑（建议重复检测）
≥40 阴性
内标(HEX) 25-30
四、应用指南与局限性
临床应用场景
早期预警：投苗前筛查，检出限可达102 copies/g
疫苗评价：免疫后14天监测病毒载量下降趋势
注意事项
采样时机：发病初期（3天内）检出率最高（＞95%）
变异株监测：需定期比对GenBank最新毒株序列（如2024年GCRV II-JX变异株）
公司正在出售的产品：
富含丝氨酸RNA结合蛋白RNPS1抗体 | 通用型KSHV（KAPOSI SARCOMA-ASSOCIATED HERPESVIRUS） |
肿瘤坏死因子α诱导蛋白1抗体 | 冰冻切片组织CASPASE-10蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
酸敏感离子通道蛋白3抗体 | 组织多胺氧化酶（PAO）活性比色法定量检测试剂盒 |
酪氨酸蛋白激酶受体A3抗体 | 白介素-17C抗体 |
血液样品组织B（CATHEPSIN B）活性比色法定量检测试剂盒 | G蛋白偶联受体97抗体 |
淋巴细胞完全培养液 | FAM101A蛋白抗体 |
200微升1厘米光径石英比色皿 | 免疫球蛋白超家族成员5抗体 |
MYC蛋白免疫共沉淀分析试剂盒 | 蛋白酶激活复合物亚基2抗体 |
通用型果胶化学比色法定量检测试剂盒 | 原癌基因N-Ras单克隆抗体 |
组织亚硝酸盐含量比色法定量检测试剂盒 | 22号染色体开放阅读框9抗体 |
NINHYDRIN蛋白质浓度定量试剂盒 | 草鱼出血病II型病毒（GCRV II）RNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）M. gastri RFLP基因分析试剂盒 |
细菌亚硝酸盐还原酶总活性比色法定量检测试剂盒 | HRP标记的碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体 |
肌苷单磷酸脱氢酶1抗体 | PDLIM2蛋白抗体 |
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