商品属性:
产品名称
布尼亚病毒(BV)检测试剂盒(荧光PCR法)
检测方法
荧光PCR法
货号
XG-P1559
应用范围
核酸的定性检测
规格
50T
用途
仅供科研研究实验
试剂盒核心信息
检测目标与流行病学意义
布尼亚病毒科(Bunyavirales)
主要病原体:
发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)
汉坦病毒(HTNV/SEOV)
克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)
靶基因选择:
L片段(RNA聚合酶基因,属特异性)
S片段(核蛋白基因,型特异性)
技术原理
三重荧光PCR:
FAM通道:通用型L片段检测
HEX通道:SFTSV S片段
CY5通道:汉坦病毒S片段
灵敏度:50拷贝/mL(血清样本)
二、试剂盒组成与样本处理
核心组分(50测试/盒)
组分 技术参数
核酸提取试剂 含病毒RNA保护剂,兼容全血/血清/蜱虫样本
RT-PCR预混液 含Tth酶(兼具逆转录和DNA聚合活性)
引物探针组 三通道设计(L-FAM/SFTSV-HEX/HTNV-CY5)
质控系统 阳性对照(灭活SFTSV+HTNV混合毒株)、阴性对照(无核酸水)、内标(人工RNA)
样本采集规范
最佳样本类型:
急性期血清(发病3-5天采集)
尸检组织(肺、肝、脾)
媒介生物(蜱虫需整体研磨)
保存要求:
短期:-80℃保存(避免反复冻融)
运输:三级生物安全包装(UN2814)
三、标准化检测流程
操作步骤(全程约3小时)
核酸提取
血清/血浆:取200μL+20μL carrier RNA
组织样本:Trizol法提取
RT-PCR反应
反应体系(25μL):
预混液12.5μL + 引物探针3μL + 模板5μL + 无核酸酶水4.5μL
扩增程序:
50℃ 20min(逆转录)→95℃ 3min→45×[95℃ 10sec→60℃ 45sec](三通道采集)
结果判读标准
检测通道 Ct值范围
FAM(L) ≤35
HEX(S) ≤35
CY5(S) ≤35
内标 25-30
四、质量控制与技术创新
关键质控措施
防污染系统:
预混液含dUTP/UNG酶
实验分区(样本处理/PCR配制/扩增分析)
性能验证:
检出限验证:10^1-10^6 copies/mL梯度检测
交叉反应:与黄病毒/沙粒病毒无交叉
2025年技术升级
数字PCR联用:绝对定量病毒载量(科研版)
CRISPR辅助:新增Cas13a荧光报告系统(现场快检版)
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