武汉尚睿生物SrCas12a-18(Cas12a)基因编辑蛋白酶，18086049136
产品简介
尚睿生物科技有限公司自主研发的专利酶CRISPR/SrCas12a-18（Cas12a）属于2类V型RNA引导的核酸内切酶，为一种特定来源的微生物基因组中编码的基因(Sr代表尚睿生物缩写)。SrCas12a-18蛋白由向导RNA（crRNA）引导剪切带有特异性序列的单链或双链DNA(ssDNA或dsDNA)。SrCas12a-18会在 PAM为5'-TTN-3'或者5'-TTTN-3'的目标DNA3'末端约17个碱基处切割，并留下5'末端悬垂末端。SrCas12a-18蛋白在目标 DNA 结合后，SrCas12a-18会切割顺式的目标 DNA 和反式的非目标单链DNA(ssDNA)，该核酸内切酶在37至60°C温度范围内具有核酸切割活性。适用于体外分子诊断，还可应用于细菌或细胞的基因编辑等。
产品名称：SrCas12a-18（Cas12a）
表达系统：E.coli大肠杆菌
蛋白分子量：148.9kDa
反应温度：37至60°C温度范围内具有核酸切割活性
使用范围/产品用途：靶向切割双链DNA后激活其非特异性单链DNA酶活性，可附带切割ssDNA报告分子，适用于体外分子诊断。
产品组分
SrCas12a-18（1μM) | 100pmol | 1000 pmol |
10×Reaction Buffer | 200μl | 2ml |
产品特点或优势
（1）CRISPR/SrCas12a-18是尚睿生物专利酶，开发产品可避开张锋团队的专利封锁。
（2）对经典PAM的反式切割活性高，适合用来建立CRISPR/Cas12a技术检测病毒核酸的方法。
（3）37至60°C具有极高的反式切割活性，为建立新型核酸CRISPR/Cas12a介导的病毒核酸可视化检测技术提供了更范围广泛的温度应用范围。
质量保证（产品标准）
编号 | 检测项目 | 检测方法 | 质量标准 | 检测结果 | 结果判定 |
① | 外观 | 目测 | 应为无色澄明液体 | 无色澄明液体 | 符合标准 |
② | 酸碱度 | pH计 | 6.4±0.5 | 6.4 | 符合标准 |
③ | 蛋白浓度(mg/ml) | 紫外分光光度计 | 1-10mg/ml | 3.6 mg/ml | 符合标准 |
④ | 纯度(SDS-PAGE) | SDS-PAGE | ≥90.00% | 95% | 符合标准 |
⑤ | 体外活性（体外顺切割）(1pmol ) | 酶切靶标+琼脂糖凝胶电泳 | ≥90.00% | ≥99%靶标被切开 | 符合标准 |
⑥ | DNase残留 | DNA孵育+凝胶电泳 | 观察电泳后DNA条带的弥散度 | DNA条带无弥散 | 符合标准 |
⑦ | RNase 残留 | RNA孵育+凝胶电泳 | 观察电泳后RNA条带的弥散度 | RNA条带无弥散 | 符合标准 |
⑧ | 核酸内切酶污染 | 带多克隆酶切位点的质粒孵育+凝胶电泳 | 质粒切割电泳扣除背景后≤20%即为合格，反之不合格。 | ＜2% | 符合标准 |
应用案例
1. 顺式切割反应体系
组分 | 体积 | 终浓度 |
SrCas12a-18(1μM) | 0.25-1μL | 12.5-50nM |
10 × Reaction Buffer | 2μL | 1× |
sgRNA(10μM) | 0.2μL | 100nM |
Target DNA(1μM) | 0.4μL | 20nM |
Nuclease-free Water | Up to 20 μL | / |
推荐反应条件：37℃反应30-60min，95℃灭活2min。
2. 反式切割反应体系
组分 | 体积 | 终浓度 |
SrCas12a-18(1μM) | 0.25-1μL | 12.5-50nM |
10 × Reaction Buffer | 2μL | 1× |
sgRNA(10μM) | 0.2μL | 100nM |
Target DNA(1μM) | 0.4μL | 20nM |
ssDNA-FQ报告基因（10μM) | 0.4μL | 20nM |
Nuclease-free Water | Up to 20 μL | / |
推荐反应条件：37℃反应10min，95℃灭活2min。
3.酶的切割活性（反式切割）qPCR图以及荧光信号图
真实应用案例
使用SrCas12-18开发一种基于CRISPR技术的绵羊Fecb基因检测联合PCR扩增试剂盒及其应用,能够实现对绵羊Fecb基因的精准识别和切割。通过精心设计的引导RNA（gRNA），使其与Fecb基因序列实现特异性结合，进而引导Cas12a蛋白对目标序列进行精确切割。切割后的DNA片段可以通过观察荧光信号的方式进行快速、准确的检测，大大提高了检测效率和准确性。
关键字： 酶;基因编辑酶;Cas12a;
武汉尚睿生物科技有限公司是一家专业从事 CRISPR/Cas 新一代核酸检测技术及其产品研发、生产、推广应用的科技型企业。公司建设有设备齐全的净化实验室和生产车间,拥有自主 CRISPR/Cas 核酸检测技术。公司与华中农业大学等高校专家合作，技术力量雄厚。
公司主营业务是以自主知识产权 CRISPR/Cas 核酸检测技术为核心，研发了猪病、禽病等经济动物和宠物系列病原体检测、转基因检测试剂盒、配套检测箱、结果自动判读数据处理贮存的手机 APP 产品生产销售和兽医远程诊断服务。公司目前已打造了基于CRISPR系统介导的体外诊断综合服务平台， 包括（1）核酸酶蛋白原料制备平台；（2）CRISPR诊断试剂盒研发与生产平台；（3）标准物质研发与生产平台；（4）现场病原体核酸即时检测平台。
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