粪肠球菌核酸检测试剂盒 新品

产品介绍：

粪肠球菌核酸检测试剂盒是一种用于体外定性或定量检测粪肠球菌（Enterococcus faecalis, EF）核酸的分子诊断工具。

粪肠球菌是革兰氏阳性菌，广泛存在于人和动物的肠道及女性生殖道中。虽然它是条件致病菌，但在免疫力低下时可引起尿路感染、败血症、心内膜炎等，同时也是医院内感染的重要病原体之一。此外，在环境监测（如水质检测）中，它也是评价粪便污染的重要指标。

以下是关于该试剂盒的详细介绍：

检测原理与技术

目前市面上的试剂盒主要基于实时荧光定量 PCR 技术（qPCR），通常采用 TaqMan 探针法。

技术原理： 针对粪肠球菌基因组 DNA 中的高度保守且具有种特异性的区域（如 16S rRNA 基因、D-alanine-D-alanine ligase gene 或 chromosomal gene encoding the cytolysin activator）设计特异性的引物和探针。

反应机制： 在 PCR 扩增过程中，随着目标序列的指数级扩增，荧光探针被酶切，释放出荧光信号（通常标记为 FAM 荧光素），仪器实时监测信号变化。

特异性： 优秀的试剂盒设计能确保与屎肠球菌（E. faecium）、大肠杆菌等其他肠道菌无交叉反应。

�� 核心性能指标

指标  参数  说明

检测样本  水样、食品、血液、组织、菌落  适用范围广

检测方法  荧光探针法（PCR-荧光探针）  特异性高，适合复杂背景样本

灵敏度  高  最低检测限可达 10² - 10³ CFU/mL 或 100 拷贝/反应

检测时间  约 1.5 - 2 小时  含核酸提取和扩增步骤

保存条件  -20℃ ±5℃  避光保存，避免反复冻融

�� 典型操作流程产品

样本采集与处理：

临床样本： 血液、尿液或组织匀浆。

环境样本： 水体样本可能需要经过滤浓缩。

菌落检测： 挑取可疑菌落进行液体培养或直接裂解。

核酸提取： 使用试剂盒配套的基因组 DNA 提取试剂（磁珠法或离心柱法）提取样本中的总 DNA。

反应体系配制： 将提取的 DNA 模板加入预混好的 PCR 反应液（含酶、引物、探针等）中。

上机扩增： 放入荧光定量 PCR 仪（如 ABI 7500、Bio-Rad CFX96 等）中运行程序。

结果判读：

阳性： FAM 通道出现典型的 S 型扩增曲线，且 Ct 值 ≤ 35-40。

阴性： 无扩增曲线，或 Ct 值 > 40。

�� 应用领域

临床诊断： 用于快速诊断由粪肠球菌引起的败血症、尿路感染等，相比传统培养法（需 24-48 小时），PCR 法更快速、灵敏。

环境监测： 用于饮用水、 recreational water（娱乐用水）中粪便污染的检测。相比大肠杆菌，粪肠球菌在水环境中生存时间更长，是评价水质粪便污染的更稳健指标。

食品卫生： 用于检测食品（如乳制品、肉类）中的粪肠球菌污染。

微生物研究： 用于肠道微生态研究或耐药基因（如万古霉素耐药基因 vanA/vanB）的筛查。

⚠️ 注意事项

用途限制： 市场上许多此类产品明确标注“仅用于科研”（RUO）或“环境/食品检测”，不得用于临床诊断，购买时需确认产品是否具备医疗器械注册证（NMPA）。

防污染： 操作必须严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），防止扩增产物污染导致假阳性。

死菌检测： 常规 PCR 检测的是 DNA，无法区分活菌与死菌。如果需要区分活菌，需使用 PMA（叠氮溴化丙锭） 预处理结合 PCR，或采用检测 RNA 的方法。

公司正在出售的产品：

1. 样本制备

使用核酸提取试剂盒纯化DNA/RNA，需设置阳性、阴性对照。

关键点：避免交叉污染，阳性对照单独存放。

2. 反应体系配置

常规PCR：引物、dNTPs、Taq酶、模板DNA。

qPCR：需额外加入探针或染料。

3. 扩增程序

常规PCR：

预变性→循环扩增→延伸

qPCR：

预变性→循环扩增（荧光采集）

4. 结果判读

常规PCR：电泳观察条带大小（如阳性对照需出现预期条带）。

qPCR：Ct值≤35为阳性，阴性对照无信号。