小茴香探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

针对小茴香基因组高度保守的特异性基因序列，设计两端分别标记FAM 荧光报告基团与TAMRA 淬灭基团的 TaqMan 探针。PCR 扩增时，Taq 酶的 5'→3' 外切酶活性切割与模板结合的探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。荧光强度随扩增循环累积，通过Ct 值（循环阈值） 实现小茴香核酸的定性鉴定与相对 / 绝对定量。

产品特点

即开即用：预混优化引物、探针及反应体系，用户仅需提供DNA模板。

高灵敏度与特异性：探针及引物针对小茴香保守序列设计，避免交叉反应。

双重检测模式：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10¹–10⁶拷贝/μL）。

内置对照：含无传染性阳性对照DNA片段，区分假阴性结果。

防污染设计：含UNG酶（可选）防止扩增产物的污染。

试剂盒组分

| 成分 | 规格/包装 | 备注 |

| 荧光定量PCR预混液 | 1 mL（2×浓度） | 含dNTPs、Mg²⁺、Taq酶等 |

| 小茴香引物探针混合液 | 100 μL | 冻干粉需用超纯水复溶 |

| 阳性对照（10⁷拷贝/μL） | 50 μL | 单独存放，避免污染 |

| 阴性对照（超纯水） | 1 mL | 用于体系验证 |

| 核酸释放剂（试用装） | 20次用量 | 可选样本前处理 |

操作流程

标准曲线制备

将阳性对照梯度稀释（10⁶–10¹拷贝/μL），独立操作避免污染。

每稀释度使用带芯枪头转移，涡旋混匀后冰上暂存。

样本DNA提取

推荐配套核酸释放剂或兼容市售提取试剂盒，设置阴性/阳性提取对照。

PCR反应体系（20μL/次）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液（2×） | 10 |

| 引物探针混合液 | 1 |

| 模板DNA | 5 |

| 超纯水 | 补足至20 |

程序设置：

预变性：95℃ 5 min

扩增（40循环）：95℃ 15 sec → 60℃ 1 min（荧光采集）

数据分析

定量：以Ct值对标准曲线log浓度回归，计算样本拷贝数。

定性：Ct≤36为阳性，≥40为阴性；36<Ct<40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域完成。

防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸清洁台面。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，无效结果需重复。

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