麦冬探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 麦冬探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Ophiopogonis Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5039 |
技术原理
本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法，通过以下步骤实现高特异性检测：
探针设计：探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当Taq酶切割探针时，报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值），结合标准曲线对目标DNA进行定量。
高特异性：引物和探针针对麦冬（Radix ophiopogonis）高度保守序列设计，避免与其他微生物交叉反应。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| qPCR酶混合液 | 50-100μL | 含逆转录酶和Taq DNA聚合酶 |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |
| 麦冬引物-探针混合液 | 100μL | 特异性扩增目标序列 |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备及质控 |
| 说明书 | 1份 | 操作流程及数据分析指南 |
操作步骤
1. 标准曲线制备（6个梯度稀释，10^1~10^7拷贝/μL）
使用阳性对照按10倍梯度稀释，避免交叉污染。
2. 样本处理
DNA提取：推荐使用兼容的柱式提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2原则）。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物-探针混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 模板DNA | 5 |
4. 反应程序
逆转录：50℃ 30分钟（若含RNA模板）
预变性：94℃ 10分钟
扩增循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤35或≤39，且扩增曲线呈典型S型。
阴性：Ct≥40，或无扩增。
灰区（35-40）：需复测确认。
注意事项
防污染：操作分区（样本制备区、PCR区），使用带滤芯枪头。
运输与储存：-20℃保存，避免反复冻融；冰袋运输（2-8℃）。
局限性：
基因突变可能导致假阴性；
交叉污染可能导致假阳性；
提取效率差异影响定量准确性。
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