检测原理
采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：
探针设计：针对蜈蚣基因保守区域设计特异性引物及探针，探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶序列的定性与定量分析。
产品名称 | 蜈蚣探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Scolopendra Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4953 |
产品组成
| 成分 | 规格/功能说明 |
| qRT-PCR缓冲液 | 500μL（提供反应体系基础环境） |
| 酶混合液 | 100μL（含逆转录酶、Taq酶等） |
| 引物混合液 | 100μL（蜈蚣特异性引物） |
| 荧光探针 | 50μL（标记FAM通道） |
| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL，人工合成DNA）|
| 阴性对照 | 50μL（无核酸酶水） |
| 模板稀释液 | 1mL（用于标准曲线制备） |
操作步骤
1. 标准曲线制备（10^2~10^7拷贝/μL梯度）
用阳性对照按10倍梯度稀释，分装至标记离心管（2-7号），冰上保存备用。
2. 样本处理
RNA/DNA提取：推荐使用商品化提取试剂盒，避免交叉污染。
对照设置：每批次需设阳性对照（PC）、阴性对照（NC）及N+2个待测样本。
3. PCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 引物混合液 | 2 |
| 荧光探针 | 1 |
| 模板RNA/DNA | 5 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录（仅RNA） | 50℃ | 30 min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |
| | 60℃ | 1 min | （采集FAM信号） |
结果判读
定量分析：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。
可疑：35<Ct<40，需复测。
阴性：Ct≥40或无扩增曲线。
注意事项
仅限科研使用：不可用于临床诊断或治疗。
防污染措施：分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。
质量控制：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且曲线正常，否则实验无效。
样本要求：避免反复冻融，长期保存需-70℃以下。
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