斑蝥探针法PCR鉴定试剂盒 新品

检测原理

基于实时荧光定量PCR技术（探针法，如TaqMan），针对斑蝥保守基因序列（如线粒体COI基因）设计特异性引物及探针，通过荧光信号扩增曲线判定目标DNA存在与否。

核心优势

高特异性：引物探针针对斑蝥独有序列设计，无交叉反应。

高灵敏度：最低检测限达100拷贝/反应。

操作便捷：预混反应液含Taq酶、dNTPs及探针，仅需添加模板DNA。

防污染设计：闭管检测，含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL标准品）及阴性对照（无菌水）。

操作流程

1. 样本制备

样本类型：斑蝥粉末、昆虫组织或DNA提取液。

DNA提取：推荐使用商品化基因组提取试剂盒，或95℃裂解液加热10分钟。

2. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积 |

| 2×Probe qPCR Mix | 10 μL |

| 酶混合液 | 1 μL |

| 引物探针混合液 | 1 μL |

| DNA模板 | 8 μL |

关键步骤：涡旋混匀预混液，瞬时离心，冰上加样。

3. 扩增程序（以ABI 7500为例）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |

| PCR反应 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 1 min | |

| 荧光采集 | 60℃ | 10 sec | |

4. 结果判定

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增。

可疑：35<Ct<40，建议重复检测。

注意事项

防污染措施：

严格分区操作（试剂准备区、样本区、扩增区）。

使用带滤芯枪头，阳性对照单独存放。

样本质量：

DNA纯度（A260/A280）应为1.8–2.0。

避免高浓度蛋白等PCR抑制物。

局限性：

仅限科研，不用于临床诊断。

无法区分活/死细胞DNA残留。

储存

运输条件：低温避光（冰袋或干冰）。

储存条件：-20℃避光保存，开封后避免反复冻融。

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