漏芦探针法PCR鉴定试剂盒
商品属性
产品名称 | 漏芦探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Rhapontici Probe-based PCR Identification Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5050 |
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于漏芦（Radix rhapontici）的快速、高特异性核酸鉴定。试剂盒包含预混优化的反应体系、引物探针组合及阳性对照，可实现定性或定量分析，灵敏度达10^1-10^6拷贝/μL，线性范围覆盖5个数量级。
试剂盒组成
PCR预混液（含热启动Taq酶、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液）
漏芦特异性引物及探针混合液（FAM标记）
阳性对照（1×10^8拷贝/μL无传染性DNA片段）
荧光RT-PCR专用模板稀释液
核酸释放剂（试用装）（可选自备提取试剂）
超纯水（无核酸酶）
使用手册
实验流程
1. 标准曲线制备
按10倍梯度稀释阳性对照（10^6-10^1拷贝/μL），独立操作避免交叉污染。
每个稀释度需更换带滤芯枪头，冰上保存备用。
2. 样本处理
DNA提取：推荐使用柱式提取法或免提取核酸释放剂，设置阴性对照（水）和制备阳性对照（阳性对照1000倍稀释液）。
探针法qPCR反应：
反应体系：20μL（含预混液10μL、引物探针2μL、模板DNA 2μL、超纯水补足）。
循环条件：95℃ 5min预变性；95℃ 15s → 60℃ 1min，40循环（以仪器优化为准）。
3. 数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴计算样本浓度。
定性检测：Ct≤36判为阳性，Ct≥40判为阴性；36<Ct<40需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
防污染措施：使用一次性耗材，实验台用10%次氯酸或75%乙醇消毒。
质量控制：
阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36且呈典型扩增曲线。
探针避光保存，避免反复冻融。
运输：低温泡沫箱加冰密封运输，避免反复冻融。
常见问题
假阴性：检查样本降解或抑制物干扰，建议重复提取。
非特异性扩增：确认引物探针特异性及操作污染。
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